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林蛙油是东北林蛙冬眠前期特异性膨大的输卵管的干燥制品,作为传统滋补品与名贵中药材,林蛙油具有增强人体免疫力的功效。但关于林蛙油中起到免疫调节作用的具体成分的研究并不深入,其作用机理尚不清楚。细胞因子是许多免疫进程中重要的调节因子,参与免疫应答、介导炎症反应。 本研究以林蛙油为研究对象,以酶联免疫吸附法测定林蛙输卵管中三种重要的细胞因子——白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度,通过免疫组织化学、免疫印迹和分子生物学手段,研究三种细胞因子与白细胞介素1受体(IL-1R1)的表达水平。为探究细胞因子的产生途径,以组织化学、免疫印迹和分子生物学手段,研究识别病原相关分子模式的主要受体——Toll样受体2(TLR2)与Toll样受体4(TLR4),以及诱导细胞因子产生的髓样分化因子88依赖性信号通路相关因子——髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)、核因子κB(NF-κB)在林蛙油中的表达以及表达水平的变化。 研究结果显示:(1)林蛙油重量与管壁厚度都显著高于繁殖期输卵管;(2)林蛙油固有层腺细胞与上皮细胞在冬眠前期增殖膨大,区别于繁殖期;(3) IL-1β、IL-1R1、IL-6与TNF-α在林蛙油均有表达,主要表达在上皮细胞;免疫印迹结果表明IL-1β、IL-1R1在林蛙油有较高表达,IL-6有较高的表达趋势,TNF-α在林蛙油中具有阳性表达;IL-1β与TNF-α在分子水平上具有阳性表达;酶联免疫吸附实验测定到IL-1β、IL-6与TNF-α的浓度;(4)在蛋白水平和分子水平上都检测到TLR2与TLR4在林蛙油中的阳性表达,且林蛙油中具有较高表达趋势;(5) MyD88、IRAK4与NF-κB在蛋白与分子水平上均有阳性表达,其中MyD88在冬眠前期林蛙油中的表达量更高。 上述结果表明,林蛙油富含一定浓度的IL-1β、IL-6和TNF-α,还可以分泌IL-1β、IL-6和TNF-α,IL-1R1的表达说明林蛙油具有合成IL-1β的能力;表达TLRs、MyD88、IRAK4与NF-κB,提示三种细胞因子可能通过TLRs、MyD88信号通路调节而产生,从而参与免疫应答、介导炎症反应。研究结果可为阐明林蛙油对机体免疫调节功能及其机理奠定理论基础,并为林蛙油的合理开发和利用提供科学的参考依据。