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目的制备载N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺[N-(4-hydroxyphenyl)retinamide,4HPR]脂质微泡(4HPR-loaded lipid microbubbles,4HPR-LM),并探讨其联合超声(Ultrasound,US)对瘢痕疙瘩的作用。方法采用薄膜-超声分散法制备载4HPR脂质体(4HPR-loaded liposome,4HPR-L),并采用单因素考察及正交试验对4HPR-L的制备条件及处方加以优化;在4HPR-L的基础上采用超声空化法制备4HPR-LM,通过透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)法、动态光散射法及 HPLC(high-performance liquid chromatograph,HPLC)法,对其外观形态、粒径分布、Zeta电位、包封率、载药量、物理稳定性、温度及超声敏感性等制剂学性质进行了考察。通过MTT比色实验对体外实验超声参数进行优化,采用激光共聚焦显微镜法观察香豆素-6脂质微泡的入胞情况,通过细胞增殖抑制试验分别评价空白脂质微泡(Blank-loaded lipid microbubbles,Blank-LM)的生物相容性及游离 4HPR、单纯 4HPR-LM、4HPR-LM联合超声的细胞增殖抑制作用,采用AnnexinV-FITC/PI双染法和Hoechst33258荧光染色法观察游离4HPR及4HPR-LM联合超声诱导人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Human Keloid Fibroblasts,HKFs)的凋亡情况。建立裸鼠瘢痕疙瘩皮下移植瘤模型,观察游离4HPR及4HPR-LM联合超声的体内抑瘤作用,并对其应用安全性进行评价。结果优化实验确定制备条件为:三氯甲烷2 ml,旋蒸30 min,水浴温度50℃,转速120 rpm/min,5%葡萄糖溶液8 ml,旋转水化溶胀时间20 min,探头超声时间5 min,过0.22 μm滤膜次数 7 次;脂质体处方为:EPC:Chol(g:g)为 11:1、4HPR 为 3mg、mPEG-DSPE2000为3 mg:制备的4HPR-L透射电镜下显示为大小均匀、外观圆整的球形或类球形结构:马尔文粒径仪检测显示平均粒径为(122.87±5.06)nm,Zeta电位为(-43.8±1.0)mV,密封保存(4℃)30天外观、平均粒径和Zeta电位均无明显变化,7 d、15 d、30 d其渗漏率分别为(1.30±0.89)%、(3.15±0.75)%、(5.88±0.63)%,说明制备的 4HPR-L 4℃冰箱内密封保存 30d稳定性良好;4HPR-LM平均粒径为(113.80±3.27)nm,Zeta电位为(-35.5±1.10)mV,包封率为(94.48±1.05)%,载药量为(8.31±0.33)%,具有一定的温度及超声敏感性,为其超声辐照下体内释药提供了理论支撑。MTT实验确定体外实验超声参数设置为3 MHz,0.7 w/cm2,60s;激光共聚焦实验显示脂质微泡的入胞速度很快,在10 min内基本能进入细胞,而超声辐照能促进入胞作用;细胞增殖抑制试验显示在本实验范围内,Blank-LM对HKFs的抑制率均在9.67%以内,表明载体材料的生物相容性良好;4HPR及4HPR-LM对HKFs的生长增殖作用均表现出浓度及时间依赖性,相比于游离4HPR,4HPR-LM能更有效地抑制HKFs的生长增殖,组间比较有统计学差异(P<0.05),而4HPR-LM联合超声辐照相比于游离4HPR及单纯4HPR-LM则表现出更强地抑制HKFs的生长增殖作用,各组间比较差异均有显著统计学差异(P<0.01);细胞凋亡实验显示,与游离4HPR相比,4HPR-LM联合超声能更有效地诱导HKFs的凋亡(P<0.01)。4HPR-LM联合超声亦较游离4HPR表现出更好地抑制人瘢痕疙瘩组织块生长的效果(P<0.01),所有裸鼠心、肝、脾、肾HE染色均未见明显器质性变化,在整个实验过程中所有裸鼠一般状态均良好,体重无明显差异,未见明显不良反应发生。结论 制备的4HPR-L稳定性良好,能对疏水性极强的4HPR进行良好的包封,极大地提高了 4HPR的水溶性,为4HPR的进一步研究奠定了良好的基础;最终制备的4HPR-LM联合超声辐照在体内外实验中显示出较好地抑制HKFs生长增殖、诱导凋亡及抑制瘢痕疙瘩生长的作用。4HPR-LM联合US是一种有效提高药物疗效的方法,有望成为治疗瘢痕疙瘩的一种新途径,值得进一步深入研究。