【摘 要】
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目的视神经脊髓炎(NM0)是一类中枢神经系统(CNS)自身免疫性炎性脱髓鞘疾病,主要累及脊髓及视神经。水通道蛋白4自身抗体(AQP4-IgG)所介导的补体依赖细胞毒性作用(CDC)被认为
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目的视神经脊髓炎(NM0)是一类中枢神经系统(CNS)自身免疫性炎性脱髓鞘疾病,主要累及脊髓及视神经。水通道蛋白4自身抗体(AQP4-IgG)所介导的补体依赖细胞毒性作用(CDC)被认为在NMO致病机制中占据重要的地位,但发病机制的研究依然任重道远:谷氨酸兴奋毒性作用是否可参与NM0的发病目前尚有争议;作为CNS的主要载脂蛋白载脂蛋白E (ApoE)缺失是否加剧NM0神经缺损尚不清楚。本研究通过检测:(1)NMO体外模型N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR, NR)表达量及培养液谷氨酸浓度(2) ApoE缺失的NMO体外模型(NMDAR,NR)表达量及培养液谷氨酸浓度。从而探讨谷氨酸及其受体NMDAR、ApoE在NM0发病中的作用。方法①提纯AQP4-IgG表达阳性患者血浆中的IgG(NMO-IgG),冷冻干燥后备用;②取7-14d大小的C57BL/6背景野生型(WT)小鼠及载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠,断头取脊髓(脊髓切成300μm薄片)体外培养;取8-10W大小的C57BL/6背景WT型小鼠及ApoE-/-小鼠,断头分离视神经体外培养;③用提纯的IgG及补体干预脊髓及视神经片制成NM0组同时设无干预的对照组;④免疫组织荧光检测脊髓、视神经中AQP4、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、NMDAR的NR1及NR2B亚单位表达情况;比色法检测培养液中谷氨酸浓度;免疫蛋白印迹法(WB)检测脊髓、视神经的NR1、NR2B蛋白表达。结果①NMO-IgG及补体干预小鼠脊髓及视神经能够诱导GFAP、AQP4表达相较于对照组明显减少(P<0.05);②NMO-IgG及补体干预脊髓和视神经能够导致NMDAR1、NMDAR2B免疫组织荧光平均积分光密度值明显增多(P<0. 05),WT型和ApoE-/-型NMO体外模型组小鼠脊髓和视神经的NMDAR1免疫组织荧光平均积分光密度值之间差异不显著(P>0. 05),但ApoE-/-型NMO体外模型组NMDAR2B免疫组织荧光平均积分光密度值要显著高于WT型NMO体外模型组(P<0. 05);③WB半定量检测NMDAR1、NMDAR2B蛋白水平发现模型组相较于对照组NMDAR1和NMDAR2B蛋白水平表达明显增多(P<0. 05),且ApoE-/-模型组NMDAR2B蛋白表达量相较于WT型模型组和对照组均显著增多(P<0. 05),但ApoE-/-模型组和WT型模型组之间NMDAR1蛋白水平无显著差异性(P>0. 05);④各组之间培养液内谷氨酸浓度无显著差异性(P>0.05)。结论①NMDAR受体可能参与NMO致病,NMDAR特别NR2B-NMDAR可能通过诱导兴奋毒性作用参与NMO发病②ApoE缺失对NMDAR的兴奋毒性作用产生影响但并不影响NMO-IgG的CDC作用。
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