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不对称分裂是指一个细胞分裂成两个从细胞形态到发育潜能都不相同的子代细胞,这是多细胞器官产生细胞多样性的一种基本方式。在所有后生动物中,卵子成熟过程都是一种典型的不对称分裂,卵母细胞通过两次不对称分裂,排出两个小体积的极体并形成一个大的成熟卵子,通过这种不对称分裂,在保证染色体均等分配的同时,可以使得卵子贮存足够的母源物质以支持之后的胚胎发育。在不对称分裂过程中,卵母细胞里的染色体经历了从细胞中央向细胞边缘的迁移,但是目前对于调控染色体迁移以及染色体位置对不对称分裂的影响的机制目前所知甚少。本研究利用体外培养体系,改变小鼠卵母细胞内腺苷酸环化酶(Cyclicadenosine monophosphate,cAMP)的水平,来观察cAMP对小鼠卵母细胞成熟的调控作用。本研究运用活细胞实时摄影技术追踪卵母细胞成熟过程,了解这个过程中染色体分离以及胞质分裂的情况。并通过免疫荧光染色,免疫印迹,以及显微操作等手段,探究小鼠卵母细胞不对称分裂的相关机制。结果如下:(1)提升卵母细胞内的cAMP水平可以使得一部分卵母细胞发生对称分裂,获得两个大小一样的后代细胞,抑制这些卵母细胞中cAMP下游蛋白激酶A(PKA)的活性,可以阻止对称分裂的发生。(2)利用活细胞实时摄影技术追踪细胞分裂过程,观察到对称定位的卵裂沟是导致卵母细胞发生对称分裂原因。更进一步的分析表明,在经过提升cAMP水平处理后的卵母细胞第一次减数分裂过程中,染色体从细胞中央到胞质边缘的迁移受到了抑制,从而导致了后期开始时染色体在细胞中央定位。(3)免疫荧光染色结合活细胞实时摄影分析表明后期开始时染色体位置决定了卵裂沟的形成位置。(4)对卵母细胞进行显微注射实验,结果显示,cAMP-PKA通路下游分子myosin II的活性对于染色体迁移具有决定性作用,一旦myosin II的活性被抑制,染色体迁移也会被显著抑制。(5)免疫荧光染色结合Western Blotting实验显示,myosin II的活性在处理后的卵母细胞中显著下降。综上,本研究证明了cAMP-PKA通路对于卵母细胞不对称分裂具有调节作用,这种调节作用是通过调节cAMP-PKA通路下游分子myosin II的活性实现的,为雌性配子发生过程的调控机制提供了一个新的解释。