【摘 要】
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该实验室将曲细精管分段分离与DDRT-PCR技术结合,筛选、克隆、鉴定精子发生过程中阶段特异性表达基因,RSD-3即是其中获得的一条新的全长cDNA,该基因全长2228bp,开放阅读框编
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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该实验室将曲细精管分段分离与DDRT-PCR技术结合,筛选、克隆、鉴定精子发生过程中阶段特异性表达基因,RSD-3即是其中获得的一条新的全长cDNA,该基因全长2228bp,开放阅读框编码一个含有526个氨基酸的蛋白质,获得GenBank接受号为AF094609.对应其编码区的5和3端序列合成引物扩增人的睾丸mRNA反转录产物,得到cDNA片段,命名为HSD-3.1、HSD-3.2.在此基础上,对HSD-3的全长进行了扩增,获得一新的全长cDNA,该基因全长1978bp,开放阅读框编码一个含有599个氨基酸的蛋白质,获得GenBank接受号为AF144487,与RSD-3的同源性为80﹪.此外该实验室在前期工作中通过LCM技术及抑制性消减杂交方法(SSH)构建了人圆形精子细胞消减人初级精母细胞cDNA文库(即初级精母细胞特异表达文库).进行斑点杂交(Dot Blotting)分析后对在两种细胞之间表达差异大于2倍的克隆进行测序,共获得329个质量满意的ESTs.该实验的另一部分工作就是对这些EST,经过网上比对,设计引物,PCR扩增初级精母细胞特异基因,获得了两个新基因HSD-35及HSD-36,同时对该实验室已经获得的几个基因进行了原核表达,为进一步的功能研究做好准备.
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