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为了探讨通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制端粒酶活性途径治疗口腔肿瘤的可行性, 本课题选用人舌癌Tca 8113细胞为实验对象。观察靶向人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的短发夹RNA(short hairpin RNA ,shRNA)转染人舌癌Tca 8113细胞后对细胞生长增殖的影响,RNA干扰前后细胞端粒酶活性及细胞形态的变化。
在方法学上根据RNA干扰原理,利用构建的表达shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表达质粒(shRNA1),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2),转染试剂(德国 metafectene)和正常培养液处理细胞。24h后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况; 24h、48h、72h用MTT法检测细胞增殖活性; 48h后行HE染色观察细胞形态、TRAP PCR-ELISA检测细胞端粒酶活性。
果显示质粒转染细胞24h后,质粒转染组可见大量表达绿色荧光的细胞, shRNA1组出现大量悬浮的表达绿色荧光的圆形死亡细胞,贴壁细胞显著减少;ELISA法显示shRNA1组人舌癌Tca 8113细胞端粒酶活性显著下降(P ﹤0.05);HE染色发现shRNA1转染后舌癌Tca 8113细胞胞体缩小、核固缩,同等培养条件下与其它组比较,细胞生长密度变稀,见许多圆形死亡细胞;而且shRNA1转染后舌癌Tca 8113细胞的生长增殖受到明显抑制(P ﹤0.01)。
因此我们可以得出初步结论:靶向hTERT mRNA的短发夹RNA能够显著降低人舌癌Tca 8113细胞的端粒酶活性,抑制舌癌细胞生长增殖,并诱导细胞死亡。