【摘 要】
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目的:探讨人乳头瘤病毒16感染的宫颈癌SiHa细胞中自噬溶酶体关键蛋白STX17的表达水平,探讨Beclin1对宫颈癌SiHa细胞中自噬溶酶体关键蛋白STX17介导的自噬的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白印迹实验法检测SiHa细胞、C33A细胞中的STX17的m RNA和蛋白表达水平。通过慢病毒转染技术在SiHa细胞中稳定过表达Beclin1,设空白对照组SiHa细胞、阴性对照组S
【基金项目】
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山西省基础研究计划（自由探索类）项目“自噬失调驱动HPV相关宫颈癌变的作用机制研究（编号:20210302123271）”
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目的:探讨人乳头瘤病毒16感染的宫颈癌SiHa细胞中自噬溶酶体关键蛋白STX17的表达水平,探讨Beclin1对宫颈癌SiHa细胞中自噬溶酶体关键蛋白STX17介导的自噬的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白印迹实验法检测SiHa细胞、C33A细胞中的STX17的m RNA和蛋白表达水平。通过慢病毒转染技术在SiHa细胞中稳定过表达Beclin1,设空白对照组SiHa细胞、阴性对照组SiHa-NC细胞、过表达组SiHaBeclin1细胞,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白印迹实验法检测SiHa、SiHaNC、SiHa-Beclin1细胞中的STX17的m RNA和蛋白表达水平。采用CCK8实验法检测SiHa、SiHa-NC、SiHa-Beclin1细胞的增殖活性;采用细胞划痕实验法测定C33A、SiHa、SiHa-NC、SiHa-Beclin1细胞的迁移能力。采用Graphpad Prism 9.0统计软件进行统计学分析,两独立样本符合方差齐时采用t检验,多组间多重比较采用LSD-t检验,检验水准为α=0.05。结果:（1）实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,与C33A细胞相比,SiHa细胞的STX17 m RNA相对表达水平较C33A细胞低（P＜0.0001）;与SiHa-NC细胞相比,SiHa-Beclin1细胞的STX17 m RNA相对表达水平较SiHa-NC细胞高（P=0.0005）;与SiHa细胞相比,SiHa-Beclin1细胞的STX17 m RNA相对表达水平较SiHa细胞高（P=0.0005）。（2）蛋白印迹实验结果显示,与C33A细胞相比,SiHa细胞的STX17蛋白相对表达水平较C33A细胞低（P=0.0087）;与SiHa-NC细胞相比,SiHa-Beclin1细胞的STX17蛋白相对表达水平较SiHa-NC细胞高（P=0.0236）;与SiHa细胞相比,SiHaBeclin1细胞的STX17蛋白相对表达水平较SiHa细胞高（P=0.0330）。（3）CCK8实验结果显示,与SiHa-NC细胞相比,刺激24h后,SiHa-Beclin1细胞与SiHa-NC细胞相比差异无统计学意义（P=0.5571）;刺激48h后,SiHa-Beclin1细胞增殖活性降低（P=0.0160）;刺激72h后,SiHa-Beclin1细胞增殖活性显著降低（P＜0.0001）;刺激96h后,SiHa-Beclin1细胞增殖活性显著降低（P＜0.0001）。与SiHa细胞相比,刺激24h后,SiHa-Beclin1细胞与SiHa细胞相比无统计学差异（P=0.5341）;刺激48h后,SiHa-Beclin1细胞增殖活性减弱（P=0.0101）;刺激72h后,SiHa-Beclin1细胞增殖活性显著减弱（P＜0.0001）;刺激96h后,SiHa-Beclin1细胞增殖活性显著减弱（P＜0.0001）。（4）划痕实验结果显示,与C33A细胞相比,SiHa细胞在24h、48h的细胞迁移能力均显著增加（P＜0.0001）;与SiHa-NC细胞相比,SiHa-Beclin1细胞在24h细胞迁移能力降低（P=0.0198）,48h细胞迁移能力明显降低（P=0.0017）;与SiHa细胞相比,SiHa-Beclin1细胞在24h细胞迁移能力降低（P=0.0239）,48h细胞迁移能力明显降低（P＜0.0001）。结论:（1）宫颈癌SiHa细胞中STX17的表达水平较低,提示自噬受抑。（2）Beclin1过表达后,宫颈癌SiHa细胞中STX17的表达水平上升,提示Beclin1在宫颈癌SiHa细胞中对STX17介导的自噬起促进作用。
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