羽藻再生过程中基因表达及其光合作用的研究

来源 :中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) | 被引量 : 2次 | 上传用户:ewqvcx
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藓羽藻(Bryopsis hypnoides)的原生质在被挤出后能够在海水中团聚形成原生质体,并且部分再生的原生质体能够发育成新的个体,这种现象是高等植物所不具有的。这一过程,是细胞内部各组分从杂乱的混沌状态经过重组、整合形成有序的新细胞的过程,是细胞膜和细胞壁从头合成的过程。本研究从以下几个不同的层次对这一过程进行了研究:⑴对藓羽藻原生质体团聚再生过程中的基因和蛋白表达差异情况进行了初步研究。利用实时定量PCR技术,对rbcL、psbO和凝集素基因的mRNA表达情况进行分析,结果发现这三个基因在原生质体再生过程中的表达变化趋势不尽相同,呈现多次起伏的现象,但三个基因的表达量均在发育6 h时最低,这可能与原生质体再生过程复杂的发育阶段密切相关。SDS-PAGE的结果显示总可溶性蛋白的分布在发育6 h后发生一些变化。以上结果初步表明原生质体团聚再生过程中的调控是多层次的,既有基因水平上的,也有蛋白水平上的。⑵藓羽藻叶绿体基因组全序列的测定。用差速离心和蔗糖密度梯度离心技术分离纯化藓羽藻的叶绿体,并进一步用高盐低pH法与氯化铯密度梯度离心相结合的方法纯化了藓羽藻叶绿体基因组DNA(约150kb),构建了其叶绿体基因组文库,通过鸟枪法测序的策略,获得叶绿体基因组的全长,并运用相关软件做了比较基因组与系统进化等相关生物信息学分析。⑶藓羽藻原生质体再生过程、藻体及原生质体失水-复水过程中光合特性的研究。结果显示原生质体团聚再生过程中的叶绿素含量、P/R比值、光合活性随着发育的时间持续下降;原生质体的光合活性与大小之间存在一定的相关性,直径在20–60μm之间的(亚)原生质体的光合活性较强,其存活率也较高。在失水过程中的光合表现,完整藻体在失水30%内光合速率保持不变,然后随水分损失的增加PSI和PSII的活性均下降,而分离的原生质体在脱水20%时其光合速率YII显著升高,然后随脱水的增加而下降;原生质体保留了完整藻体的部分忍耐干燥的能力,但其忍耐性低于藻体,细胞壁在这当中可能起着重要作用。
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