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骨肉瘤（Osteosarcoma，OS）是骨组织的一种最常见的原发性恶性肿瘤，好发于青少年，常早期出现血行转移，五年生存率低，严重危害着患者的生命和健康。目前骨肉瘤的病因和发病机制仍不清楚。研究细胞周期调控，确立调控进程分子机制，很可能会阐明致癌机制，开辟新的治疗途径。P27kiP1是新发现的一个重要的CKI（cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI）分子，它通过对CDK（cyclin-dependent kinase）活性的抑制，从而对细胞周期进行负调控。cyclinE属于G1期的正调节因子，结合并激活CDK，启动DNA合成，从而实现G1/S期转化。肿瘤细胞的增殖率是决定肿瘤生物学行为的一个重要参数，ki-67是研究细胞增殖状态的较好指标。目前关于P27kiP1、cyclinE和ki-67基因在人骨肉瘤中联合表达的研究，国内外还尚未见报道。本研究选取30例人骨肉瘤标本，按刘昌茂分级法分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，其中Ⅰ级7例，Ⅱ级14例，Ⅲ级9例。10例骨软骨瘤作为对照。采用免疫组化S-P法，探讨了P27kip1、cyclinE及ki-67基因在人骨肉瘤中表达的生物学意义和相互关系。 结果显示： 1．P27蛋白表达：（1）骨软骨瘤组的阳性表达率为80％（8/10），其中弱阳性2例，中度阳性3例，强阳性3例；骨肉瘤组的阳性表达率为33.33％（10/30），其中弱阳性7例，中度阳性2例，强阳性1例。比较两组的染色阳性率和染色强度，差异均有显著性（P＜0.05）。（2）骨肉瘤Ⅰ级组阳性表达率为71.43％（5/7），其中弱阳性3例，中度阳性1例，强阳性1例；骨肉瘤Ⅱ、Ⅲ级组的阳性表达率为21.74％（5/23），其中弱阳性4例，中度阳性1例。比较骨肉瘤Ⅰ级组与Ⅱ、Ⅲ郑州大学2003届硕士学位论文人骨肉瘤中P27kiPI、eyelinE和ki一67的表达研究级组染色阳性率和染色强度，差异均有显著性（P<0.05）。（3）骨母细胞型（I型）组染色阳性例数为5例，阴性例数9例;软骨母细胞型（2型）组染色阳性例数为2例，阴性例数为3例;纤维母细胞型（3型）组染色阳性例数为2例，阴性例数为6例;混合型（4型）组染色阳性例数为1例，阴性例数为2例。比较骨肉瘤各病理亚型的染色结果，差异无显著性护>0.05)。 2.CyclinE蛋白表达:（l）骨软骨瘤组的阳性表达率为30%（ 3/10），其中弱阳性2例，中度阳性1例;骨肉瘤组的阳性表达率为93.33%（28/30），其中弱阳性6例，中度阳性16例，强阳性6例。比较两组的染色阳性率和染色强度，差异均有高度显著性（P<0.01）。（2）骨肉瘤I级组阳性表达率为85.71%（6/7），其中弱阳性4例，中度阳性1例，强阳性l例;骨肉瘤n、nl级组的阳性表达率为95.65%（22/23），其中弱阳性2例，中度阳性15例，强阳性5例。比较骨肉瘤I级和n、nl级组染色阳性率，差异无显著性（P>0.05）。比较骨肉瘤组I级和11、111级组染色强度，差异有显著性印叱0.05)。（3）骨母细胞型组染色阳性例数为13例，阴性例数为1例;软骨母细胞型组染色阳性例数为4例，阴性例数为1例;纤维母细胞型染色阳性例数为8例，无阴性染色;混合型组染色阳性例数为3例，无阴性染色。比较骨肉瘤各病理类型的染色结果，差异无显著性 （尸>0 .05）。 3.幻一67蛋白表达:（1）骨软骨瘤组的阳性表达率为10%（1/10），该例为低表达;骨肉瘤组的阳性表达率为66.67%（20/30），其中低表达8例，高表达12例。比较两组的染色阳性和染色强度，差异均有高度显著性（P<0.01二;（2）骨肉瘤I级组阳性表达率为28.57%（2/7），其中低表达1例，高表达1例;骨肉瘤11、111级组的阳性表达率为7色26%（18/23），其中低表达7例，高表达n例。比较骨肉瘤I级与11、m级组染色阳性率和染色强度，差异均有显著性（P<0.05）。（3）骨母细胞型染色阳性例数为10例，阴性例数为4例;软骨母细胞型组染色阳性例数为3例，阴性例数为2例;纤维母细胞型组染色阳性例数为6例，阴性例数为2例;混合型组染色阳性例数为1例，阴性例数为2例。比较骨肉瘤各病理类型的染色结果，差异无显著性护>0.05）。 4.骨肉瘤中P27，cychnE与ki一67三者蛋白表达强度之间用spe皿等级相关分析显示，P27蛋白表达强度与cyclinE蛋白表达强度之间呈显著负相关（rs=郑州大学2003届硕士学位论文人骨肉瘤中p27kipl、卿clinE和ki一67的表达研究一0.432，P<0.05）;P27蛋白表达强度与ki一67表达强度之间相关无显著性（rs二一0.34，P>0.05）;cyclinE蛋白表达强度与ki一67蛋白表达强度之间呈显著正相关 （rs=0 .641，P<0.ol）。 小结:1.骨肉瘤组比骨软骨瘤组中P27蛋白阳性表达率及强度均降低 （尸<0.05），且P27蛋白的阳性表达强度与骨肉瘤的恶性程度相关联，恶性程度越高，表达越弱，提示P27蛋白与骨肉瘤的发生发展密切相关，可以作为判断骨肉瘤分级的指标。 2.骨肉瘤组比骨软骨瘤组cydinE蛋白阳性表达率显著增高（尸<0.05），提示骨肉瘤的发生与cycllnE蛋白过表达有关。 3.骨肉瘤的恶性程度与ki一67的阳性表达率和表达强度相关联，恶性程度越高，增殖活性越强，表明ki一67的阳性表达率和表达程度是判断骨肉瘤恶性程度的一个指标。 4.骨肉瘤中P27蛋白和cyclinE蛋白表达强度呈显著负相关(rs=一0.4