单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称LM,单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,该菌广泛地存在于环境中,传染途径繁多。近年来大规模的李斯特菌病频频爆发,引起世界各国的高度重视。目前国内外食品中单增李斯特菌的常用检测方法主要有传统的微生物学检测、分子生物学检测和免疫学检测。免疫学方法具有快速、特异性强、操作简便、结果易于判断等特点,但是抗体的特异性是限制免疫学检测灵敏度和准确性的首要因素。因此,获取针对单增李斯特菌的高特异性抗体是建立快速有效的单增李斯特菌诊断方法的物质基础。本文在单增李斯特菌的国标分离方法和ISO分离标准的基础上,采用Fraser肉汤增菌液结合PALCAM选择性培养基与PCR扩增(或16S rDNA测序)方案,建立了一种单增李斯特菌的快速分离鉴定方法。该法可以在3-5d内完成单增李斯特菌的分离与鉴定。本文所建立的方法不仅可用于一般实验室的单增李斯特菌分离纯化工作,尤其适用于大量样本中单增李斯特菌的分离与鉴定。采用三种灭活方式(强酸性电解水灭活、加热灭活、紫外灭活)处理单增李斯特菌来制备免疫抗原,并对其免疫原性进行比较分析。实验结果证实紫外灭活细菌具有较好的免疫原性,电解水处理细菌效果最差,结合电镜扫描图片可知,可初步判定细菌表面的完整性与细菌的免疫原性有一定的关系,此结论可为后续菌体抗原的制备提供一定的参考价值。本研究采用紫外灭活的细菌菌体为免疫抗原,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔,从而制备单克隆抗体和多克隆抗体。最终获得1株特异性的杂交瘤细胞株和数十毫升多克隆抗体。杂交瘤细胞株分泌的抗体能够特异性识别单增李斯特菌,与李斯特菌属其他细菌有较弱交叉反应。制备的多克隆抗体能够特异性识别李斯特菌属细菌。利用所得抗体制备免疫磁珠,从单增李斯特菌的快速富集和检测两个方面进行了抗体的应用可行性探讨。实验结果证实本研究制备抗体具有应用价值。本研究为单增李斯特菌免疫学检测的开发奠定了物质基础,对推动单增李斯特菌免疫学检测技术的发展具有重要意义。