先天性肛门直肠畸形(congenital anorectal malformations，ARM)是小儿常见的消化道畸形，其发生率约1/1000-1/1500，是世界卫生组织常规监测先天畸形之一。由于其发生机制不清楚，病理改变复杂，目前尚无良好的治疗方法，虽然手术可以实现肛门的解剖位置重建，但术后肛门直肠功能的恢复面临很大的挑战，至少有1/3的患儿术后存在不同程度的便失禁和便秘等排便功能障碍，并需要终生进行治疗。近年来研究显示其脊髓运动神经元和盆底肌肉的感觉和运动神经末梢均存在明显发育异常。本研究应用tunel法，对不同时期胎鼠腰骶髓凋亡神经元的形态、分布和数量进行研究，旨在讨论先天性肛门直肠畸形的发生机制和病理改变，对于探索新的治疗方法、提高治疗效果具有极其重要的意义。　　 实验材料与方法：　　 一、模型制作　　 Wistar大鼠25只，体重250～300 g。雌雄（比例为4∶1）交配后，清晨阴道涂片，发现精子者定为孕0d，在孕10 d时，15只孕鼠为致畸组，经胃管注入1％乙烯硫脲(ETU)，剂量为150 mg/kg，制作肛门直肠畸形动物模型。5只孕鼠为对照组，注入等量生理盐水。妊娠第15天、第17天、第19天、第21天剖宫，检查胚胎外观判定肛门直肠畸形发生情况并记录　　 二、实验分组及标本制备　　 正常组取正常胎鼠（15天、17天、19天、21天）腰骶段脊髓标本各5份，畸形组取肛门直肠畸形畸形胎鼠(15天、17天、19天、21天)腰骶段脊髓标本各5份。新鲜标本4％多聚甲醛固定24 h后石蜡包埋，切片厚度4μm，连续5片，行神经细胞凋亡检测　　 三、TUNEL法细胞凋亡检测　　 TUNEL法脊髓神经细胞凋亡检测原位末端标记法(TUNEI)标记凋亡神经细胞，细胞凋亡检测试剂盒由罗氏公司提供。实验步骤按试剂说明书进行操作。　　 四、结果判定　　 光镜下神经细胞胞体缩小，胞核内见棕褐色颗粒为凋亡的神经细胞，取400倍下脊髓前角不同的5个以上视野计数500个细胞中凋亡细胞数，凋亡指数(AI)=凋亡细胞数/500×100％。　　 五、统计学分析　　 两组标本脊髓神经细胞凋亡指数采用卡方检验。p＜0.05认为有统计学意义。　　 结果：　　 表1，各阶段凋亡指数见下表。各个阶段凋亡指数┏━━━┳━━━━━┳━━━━━┳━━━━━┳━━━━━┓┃┃15天┃17天┃19天┃21天┃┣━━━╋━━━━━╋━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃NS┃0.5┃0.5┃0.5┃0.5┃┣━━━╋━━━━━╋━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃ ETU┃16.6┃53┃41┃30.1┃┗━━━┻━━━━━┻━━━━━┻━━━━━┻━━━━━┛　　 表2，ETU致畸组标记凋亡神经元比较┏━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃17天┃19天┃21天┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃15天 X=29.2┃ X2=14.52┃ X2=5.02┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃ P＜0.01┃ P＜0.01┃0.01＜P＜0.05┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃17天┃ X2=2.89┃ X2=10.89┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃┃ P＞0.05┃ P＜0.01┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃19天┃┃X2=2.64┃┃┃┃P＞0.05┃┗━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━┛　　 结论：　　 先天性肛门直肠畸形胎鼠脊髓凋亡神经元数目增多，提示神经细胞的过度凋亡与肛门直肠畸形的发生密切相关