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背景肺动脉高压是一种高致死率疾病,缺乏有效治疗措施,临床预后差。其血流动力学特征为静息状态下平均肺动脉压力(mPAP)≥25mmHg,肺毛细血管楔压(pulmonary capillary wedge pressure,PCWP)或左心室舒张末压<15mmHg。目前根据其血流动力学特点及病理、病理生理学特点分为动脉性肺动脉高压、左心疾病所致肺动脉高压、肺部疾病和(或)低氧所致的肺动脉高压、慢性血栓栓塞性肺动脉高压和其他肺动脉阻塞性疾病以及原因不明和/或多种因素所致肺动脉高压五类。低氧性肺动脉高压(Hypoxia-induced pulmonary hypertension HPH)是其中常见的一个类型。PAH主要病理基础为肺动脉中膜平滑肌细胞的异常增殖、迁移,导致肺动脉血管管腔狭窄、重构,从而导致肺动脉高压。由此可见,肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)的异常增殖和迁移是HPH发生、发展的关键。目前已有较多关于PASMCs异常增殖及迁移的研究,发现有多种因子参与其中,例如α烯醇酶通过AMPK/AKT通路调节了 PASMCs的增殖,NMDA型谷氨酸受体活化促进PASMCs增殖等,但是其具体的机制需进一步明确。偶联因子6(coupling factor 6,CF6)是新近发现的一种细胞活性因子,参与能量代谢。CF6是ATP合酶的一个结构亚基,人体CF6前体由128个氨基酸组成,在各组织器官中广泛表达,广泛分布于线粒体膜上。但又不仅存在于线粒体,也密集分布于细胞膜上。CF6是一种强烈的血管收缩肽,它通过抑制磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)的活性,减少了花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)释放,从而抑制了 PGI2合成,导致血管收缩,血压升高,是目前唯一的内源性PGI2的抑制剂。目前已有大量的研究发现,其在高血压、冠心病等多种心血管疾病中均表达升高,本课题组前期在野百合碱(MCT)造模的肺动脉高压大鼠肺组织及血浆中均发现CF6明显升高,提示CF6可能参与了 MCT诱导的PAH的发生、发展。但其在HPH中的作用及机制尚不明确。目的本研究旨在通过构建低氧诱导的PAH大鼠模型及体外细胞实验,来探讨CF6在HPH发生、发展中的作用及其机制,能够为HPH治疗提供新的靶点。方法动物实验:将大鼠分为实验组及对照组,实验组大鼠置于低氧箱中饲养28天,构建低氧诱导的PAH大鼠模型,对照组于常氧环境下饲养。在实验的第28天,检测两组大鼠的平均肺动脉压力(mPAP),计算Fulton指数(RV/LV+S),通过心脏彩超检查大鼠的右心室壁厚度和左右心室面积,确认低氧性肺动脉高压大鼠造模成功。确认造模成功后,采用ELISA、Western-blot、免疫组化等方法,检测不同低氧时间段的大鼠血浆中CF6浓度的变化以及肺组织CF6的mRNA表达变化。细胞实验:购买大鼠肺动脉原代平滑肌细胞(PASMCs),实验组予以CF6刺激24小时,通过定量实验(CCK8法)及定性实验(细胞划痕实验)检测实验组及对照组细胞增殖及细胞迁移情况。结果1.低氧28天后,实验组大鼠的血压较对照组轻度升高,但差异没有统计学意义(P>0.05);2.低氧28天后,实验组大鼠mPAP、Fulton指数、右心室壁厚度、右心室面积较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),说明HPH大鼠造模成功;3.实验组大鼠的血浆CF6浓度升高,呈时间依赖性,到第三周时达高峰,第四周有轻度下降,但较对照组仍明显升高(P<0.05);4.CCK8结果提示,当CF6浓度为10-7mmol/L时,大鼠PASMCs细胞经CF6刺激24小时后,吸光度较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);5.在细胞划痕实验中,CF6刺激后12h开始,观察到PASMCs开始向中线迁移,随着刺激时间的延长,迁移距离逐渐增加,且迁移率亦明显增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在低氧诱导的HPH大鼠模型中CF6的表达明显升高,提示CF6在HPH的发生、发展中发挥了重要作用。它的可能机制为CF6促进了 PASMCs的增殖和迁移,进而导致肺动脉重构、管腔狭窄甚至闭塞。