N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ和整合素α5β1对人结肠癌细胞HT29迁移与侵袭能力影响的初步研究

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N-乙酰氨基葡萄糖转移酶系(GnTs)是一类催化乙酰氨基葡萄糖以不同类型糖苷键连接在N-糖链上的酶家族。N-糖链在细胞粘附、迁移、增殖与分化中起重要作用。GnT-Ⅲ催化UDP-GlcNAc以β-1,4方式连接在核心甘露糖残基上,形成平分型糖链。肿瘤细胞表面糖蛋白糖链结构的改变往往与肿瘤细胞的恶性程度直接相关。   整合素是一类重要的细胞表面粘附分子家族,在发育、细胞增殖、抗凋亡及恶性转化中起重要作用。整合素α3β1是一种层粘连蛋白受体,整合素α5β1是一种纤连蛋白受体,在肿瘤细胞中,α3β1通常与其侵袭作用相关,α5β1与其迁移作用相关。   中国结肠癌的发病率高居肿瘤发病率第三位,为常见恶性肿瘤之一。据统计,2011年结肠癌发病率达到56/100000。研究结肠癌的发生、发展和转移机制,对于发现更直接有效的诊疗手段具有重要意义。   本研究以人结肠癌细胞系HT29为研究对象,采用RNAi技术下调HT29细胞中GnT-Ⅲ的表达,应用RT-PCR及蛋白质免疫印迹检测GnT-Ⅲ表达变化,采用凝集素印迹检测细胞内平分型糖链及β-1,6分枝糖链表达的变化;使用体外迁移侵袭实验分析GnT-Ⅲ表达下调以及应用抗体封闭处理整合素α3β1与α5β1后,HT29细胞迁移与侵袭能力的改变,旨在研究GnT-Ⅲ和整合素α5β1、α3β1对人结肠癌细胞系HT29迁移与侵袭能力的影响,进而阐明细胞表面N-糖链和整合素与HT29细胞迁移与侵袭等生物学行为的关系。   本研究结果表明,GnT-Ⅲ特异性siRNA转染HT29细胞后,GnT-Ⅲ表达下调,但整合素α3β1与α5β1的表达没有改变;HT29细胞N-聚糖的平分型分枝结构减少后,细胞的迁移与侵袭能力明显增加;使用整合素α3β1与α5β1亚基抗体分别封闭HT29细胞后,与对照组相比,HT29细胞后细胞迁移与侵袭能力均下降。   本研究结果提示,GnT-Ⅲ的表达下调、细胞N-聚糖的平分型分枝结构减少可以促进人结肠癌HT29细胞的迁移与侵袭;在人结肠癌HT29细胞中,整合素α3β1与其侵袭能力相关,而α5β1与其迁移能力相关。
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