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SNXs(Sorting Nexins)是一类含有PX结构域(phox-homology domain)的蛋白家族。SNXs在哺乳动物中含有34种亚型,主要参与细胞内膜系统的运输活动和信号通路的调控,在胞吞途径和细胞内蛋白的运输中均具有重要作用。根据SNXs的结构域分类,其中一个亚家族包括SNX13、SNX14、SNX19、SNX25,除了SNX19缺失RGS结构域,均含有真核生物中保守的PXA、RGS、PX和PXC结构域。本课题研究的是其中最具有代表性的SNX13。 SNX13作为SNXs家族的一员,其PX结构域可以与磷脂酰肌醇PtdIns3P结合,介导SNX13定位在初级内体膜上并参与细胞内膜系统的运输。SNX13的RGS结构域可以特异性结合Gαs,催化GTP的水解并下调G蛋白偶联受体如β肾上腺素受体和5-羟色胺受体等介导的cAMP-PKA信号通路。SNX13的结构生物学研究将有助于我们理解SNX13调控各信号通路和胞内体运输的分子机制。 本研究采用大肠杆菌原核表达系统已经获得状态稳定均一的高纯度人源SNX13RGS和PX结构域重组蛋白,并通过初筛和优化获得了野生型和甲基化PX结构域的晶体。高分辨率晶体结构分析发现SNX13的PX结构域具有典型的磷脂结合碱性口袋;蛋白-脂质结合实验和等温滴定量热实验再次证实其PX结构域对PtdIns3P的结合特异性。此外,我们尚未获得符合结晶初筛要求的RGS-PX重组蛋白和RG S/Gαs-GDP-AlF4--Mg2+二元蛋白复合物,针对它们的纯化方法仍需进一步的研究和探索。