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麻疯树种仁含油率高达60%,榨油后的饼粕含有很高的蛋白质含量,是潜在的植物蛋白饲料资源,但是由于含有生物毒性物质——佛波酯,限制了麻疯树饼粕在动物饲料中的应用。微生物发酵麻疯树饼粕,不仅可以使饼粕中的佛波酯得到降解,各类抗营养因子得以去除,同时还能将麻疯树饼粕的营养价值得到提高。本论文在筛选出有效降解佛波酯菌株的基础上,研究了固态发酵法降解麻疯树饼粕中佛波酯的工艺,并评定了发酵麻疯树饼粕替代豆粕的效果。1.麻疯树饼粕佛波酯降解菌株的筛选从自然环境中筛选能降解佛波酯的菌株,首先建立了用HPLC测定麻疯树中佛波醇酯的方法。采用Agilent Extend-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为水:乙腈=20:80,添加0.3%甲酸,流速为1.OmL/min,柱温为25℃,检测波长为280 nm。在3～500μg/mL范围内佛波醇浓度(Y)与峰面积(X)线性关系良好,回归方程为Y=1523X-22.79,r=0.997。以麻疯树种油为唯一碳源,从攀枝花麻疯树种植园土壤中初筛得到28株菌,通过摇瓶复筛选出降解佛波酯效果最好的Z11菌株,对该菌株进行了生理生化特性鉴定、16SrDNA序列测定及GenBank序列相似性分析,最终鉴定结果为肠杆菌属阴沟肠杆菌(Enterobac cloacae),编号MF102129。通过分光光度法测定该菌株的生长活力,结果表明该菌株生长的最适条件是温度30℃,pH7.8,最佳碳源和氮源分别是蔗糖和蛋白胨。2.Z11菌株固态发酵麻疯树饼粕工艺研究用Z11菌株固态发酵麻疯树饼粕,通过单因素试验及响应面法对发酵降解佛波酯进行了系统优化。结果发现,Z11发酵麻疯树饼粕最适条件是温度30℃、初始pH值7.8、接种量20%、初始含水量50%,发酵时间为5d。验证试验最高佛波酯降解率为50.7%。发酵后麻疯树饼粕中粗蛋白含量较发酵前提高29.8%,总必需氨基酸含量提高了 16.4%,其中赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸含量较发酵前分别提高了 14.9%、50%和38.2%。发酵后麻疯树饼粕中的其他抗营养因子含量也有不同程度的降低,其中植酸、单宁、胰蛋白酶抑制剂和植物凝集素的含量分别下降72.0%、37.8%、98.2%和88.9%。3.发酵麻疯树饼粕替代豆粕的效果研究采用大鼠评定发酵麻疯树饼粕的生物学效价。试验分为空白对照组和3个试验组,分别用5%、8%、10%(干物质计)的发酵麻疯树饼粕替代豆粕(FJSC5,FJSC8,FJSC10)。试验期28天,测定了大鼠的采食量、体增重、血液生化指标及脏器系数等。结果发现,随着饲料中发酵麻疯树饼粕的替代量增加,大鼠的采食量和体增重都显著下降(P<0.05);对照组和FJSC5组的饲料效率显著高于FJSC8和FJSC10组(P<0.05)。血清生化指标结果,FJSC10组的碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总蛋白(TP)显著低于其他三个组(P<0.05),其它组大鼠的ALP、尿素(UREA)和白蛋白(ALB)指标无显著差异(P>0.05)。大鼠的肝脏、肾脏、脾脏和肺的脏器系数结果分析,没有发现四个组间大鼠肝脏和脾脏系数的显著差异(P>0.05)。对器官进行切片染色观察发现,高用量组的大鼠与对照组相比,肾脏和肺有轻度炎症表现,肝脏和脾脏无显著变化。综上所述,本文建立了麻疯树饼粕中佛波酯的高效液相色谱测定方法,从麻疯树种植园土壤中筛选到一株高效降解佛波酯的阴沟肠杆菌Z11,该菌株在优化条件下对麻疯树饼粕中佛波酯降解率达到最大值51.6%。使用发酵后饼粕低水平替代部分豆粕饲喂大鼠后,对饲料转化率和大鼠部分血液生化指标无显著影响。