目的:瘦素信号通路缺失(瘦素抵抗)是二型糖尿病的并发症之一,现有的研宄显示,中枢和外周途径的瘦素信号对骨量、脂肪含量都有较为明显的影响。但瘦素信号对于两种不同来源的间充质干细胞作用是否相同,与之相关的作用靶点是什么却不甚了解。本研宄旨在对瘦素信号在不同来源间充质干细胞中的具体作用方式及靶点进行探索,为解释两种不同靶器官对于瘦素信号的应答提供依据。　　方法:实验一:对瘦素缺失小鼠组(ob/ob),瘦素受体缺失小鼠组(db/db),正常野生型小鼠组(WT),重组瘦素恢复瘦素缺失小鼠瘦素信号组(ob/ob+1印tin)进行骨形态学、成骨和破骨细胞功能、体内白色脂肪含量、摄食量的测定。确定瘦素信号缺失对于两种器官(组织)生理功能的影响。　　实验二:以酶消化法和全骨髓法培养脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞(MSCs),经流式细胞术鉴定表面分子,分组同前。MTT、克隆形成能力试验(CFUassay)检测细胞增殖能力,成骨、成脂分化实验检测细胞相关分化能力。PCR与 Western Blot检测相关基因与蛋白水平的变化。　　实验三:对细胞体外进行PPARy信号与AMPK信号的激活,观察细胞成脂成骨能力的变化及相关基因和蛋白表达的变化。　　结果:实验一、MicroCT通过股骨远端骨密度(BMD)、骨量/组织量(BV/TV)、骨小梁粗细(Tr.Th)、骨小梁数量(T r.N)骨小梁间距(Tr.S)等骨形态学指标检测提示ob/ob小鼠均明显高于WT小鼠且WT小鼠高于db/db小鼠。HE染色、新骨形成率(BFR)、抗酒石酸酸性磷酸酶活性(TRAP)、血清成骨破骨标志物检测提示相同趋势。骨髓腔油红0染色提示瘦素信号缺失(Iep-/-)小鼠的骨髓腔内有较多脂滴形成。骨长度、皮质骨密度检测提不Iep-/-小鼠较WT小鼠有明显的下降。Iep-/-小鼠的体重和相关白色脂肪、摄食量均较WT小鼠有明显的增加,瘦素信号的恢复对体重的改变是明显的。　　实验二、分离的脂肪与骨髓来源的间充质干细胞经流式表面分子鉴定符合干细胞特征。MTT实验、克隆形成能力提示瘦素信号的缺失方式不同会影响骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)增殖能力,克隆形成集落骨向分化能力实验(CFU-O)提示三种来源细胞无明显差异,而克隆形成集落脂向分化能力实验(CFU-A)显示:1印-/-小鼠明显强于WT小鼠。而脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)方面,增殖分化相关实验结果提示I印-/-来源的ADSCs增殖能力较强、成骨分化能力较弱而成脂分化能力较强。相关基因蛋白的结果与染色结果一致。重组瘦素可以恢复瘦素缺失的MSCs的生物学行为异常。　　实验三:PPARy激活剂罗格列酮可明显增强WT来源ADSCs的脂向分化能力,却对瘦素信号缺失的ADSCs作用甚微;AMPK激活剂二甲双胍对不同来源的BMSCs增强成骨分化能力的作用一致。重组瘦素可扭转罗格列酮对MSCs成脂分化过程影响的差异,却对二甲双胍造成的成骨能力上升无明显作用。　　结论:1、瘦素信号通路的缺失对小鼠长骨的骨量有明显的影响,但瘦素缺失与其受体缺失所起的作用不完全相同,提示除外周循环条件下瘦素的直接作用以外,可能存在瘦素于中枢交感神经的信号对骨量存在作用且是主要作用的可能。且瘦素对发育期的骨形成有较为明显的影响。瘦素对小鼠体内白色脂肪生成的刺激作用两种不同的信号缺失方式较一致。　　2、ob/ob小鼠的骨量上升是一种高成骨和高破骨的高转换型骨量上升;db/db小鼠的骨质疏松是一种低成骨和低破骨共同作用的低转换型骨质疏松。　　3、瘦素信号对BMSCs的增殖能力、成脂分化能力影响明显,而对成骨分化能力影响不大。瘦素信号对ADSCs的增殖、分化能力均具有明显影响。　　4、瘦素信号可能通过抑制PPARy的活化来抑制ADSCs的成脂分化能力。而对BMSCs的成骨分化能力的影响应该在AMPK信号的上游。