P物质及其受体NK-1在非小细胞肺癌中的表达及作用

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目的:①了解P物质(substance P,SP)及其受体神经激肽-1(NK-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及人肺腺癌细胞系A549细胞系中的表达特点。②研究NK-1特异性激动剂[Sar9,Met(O2)11]substance P(SMSP)以及特异性拮抗剂SR140333对体外培养的A549细胞系生长增殖的影响。③探讨P物质及NK-1在NSCLC发展中的作用,临床意义。④探讨SR140333对NSCLC治疗的作用及意义。   方法:①分别采用免疫组织化学法检测NSCLC原发瘤组织,相应癌旁组织及解剖标本中相对正常肺组织标本中P物质和NK-1的表达情况。②采用免疫细胞化学染色检测二者在A549细胞系的表达特点。③采用MTT比色法检测不同浓度的SMSP和SR140333单独及共同作用后A549细胞生长增殖的变化。④采用流式细胞技术检测SR140333作用后A549细胞线粒体膜电位及生长周期的变化。⑤采用Hoechst33258荧光染色观察SR140333作用后细胞的凋亡情况。⑥使用SPSS16.0软件,对实验结果进行统计学分析。P<0.05作为有统计学差异的标准。   结果:①在NSCLC组织以及A549细胞系中P物质和NK-1均呈阳性表达;P物质阳性颗粒位于肿瘤细胞胞浆,而NK-1主要位于肿瘤细胞胞膜,部分位于细胞浆;二者在NSCLC组织中表达水平同肿瘤分化程度相关。②二者在癌旁组织和相对正常肺组织有少许表达于细胞浆内。③在A549细胞系中P物质和NK-1呈阳性表达。表达部位与组织相符。发现加入10-6 M SR140333的A549细胞每高倍视野P物质和NK-1阳性表达计数明显高于仅加入培养液的细胞。④单独使用SMSP时,浓度10-10M到10-5M均可促进A549细胞系的生长增殖,浓度为10-7M时其促增殖作用最明显;单独使用SR140333时,浓度10-10M到10-5M时能够减缓并抑制A549细胞系的增殖,其中浓度为10-6M时抑制增殖作用最明显;SMSP同SR140333合用时,10-6M的SR140333能够抑制10-7M的SMSP引起的细胞增殖作用。⑤Hoechst33258荧光染色证明和流式细胞术测定证明SR140333作用后可以引起A549细胞系增殖减缓并发生凋亡。   结论:①P物质与其NK-1受体在NSCLC组织及A549细胞中高表达,提示神经内分泌参与NSCLC的发生和发展过程。②P物质能够通过NK-1受体促进体外培养的A549细胞的增殖。③NK-1受体拮抗剂SR140333能够抑制A549细胞的生长作用,促进其凋亡。④NK-1受体可成为治疗NSCLC的新靶点,SR140333有望做为治疗NSCLC的药物进行研究。
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