论文部分内容阅读
第一部分骨癌痛大鼠脊髓CX3CR1表达的变化目的观察脊髓趋化因子受体CX3CR1在骨癌痛大鼠中的表达变化,探讨其在骨癌痛中的作用。方法雌性未交配SD大鼠50只,随机分为5组,每组10只。对照(C)组、假手术(S)组、骨癌痛6天(B6)组、骨癌痛12天(B12)组、骨癌痛18天(B18)组。C组不给予任何处理,S组和B6、B12、B18组分别在左胫骨上端注射Hank’s液和Walker256乳腺癌细胞5μl。各组分别于术前1 d(基础值)、术后6、12、18 d测定机械性痛阈值和双后肢负重差。C组和S组于术后18 d,B6、B12、B18组于术后6、12、18 d各随机处死10只大鼠,取L4~L6脊髓组织,6只大鼠采用免疫组化法计数CX3CR1阳性细胞,另外4只大鼠采用Western blot法测定CX3CR1蛋白表达水平。结果与C组和S组比较,B6、B12、B18组各时点机械性痛阈值下降(P<0.01),左侧后肢负重下降,双后肢负重差升高(P<0.01);脊髓CX3CR1阳性细胞数和蛋白表达水平升高(P<0.01)。与B6组比较,B12、B18组机械性痛阈值下降(P<0.01),左侧后肢负重下降,双后肢负重差升高(P<0.05);脊髓CX3CR1阳性细胞数和蛋白表达水平升高(P<0.05)。而B12组和B18组比较,机械性痛阈值、双后肢负重差,及脊髓CX3CR1阳性细胞数和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓趋化因子受体CX3CR1表达上调参与了大鼠骨癌痛的产生和维持。第二部分鞘内注射CX3CR1抗体对骨癌痛大鼠机械痛阈的影响及其脊髓机理目的观察鞘内注射趋化因子Fractalkine(FKN)受体CX3CR1的中和抗体对骨癌痛大鼠痛觉过敏的影响,并通过脊髓胶质细胞的变化探讨Fractalkine的脊髓部位作用机理。方法采用Walker256乳腺癌细胞,注射在胫骨上端建立骨癌痛模型。雌性SD大鼠40只,随机分为5组(n=8),Ⅰ组(Hank’s液对照组);Ⅱ组(骨癌痛组);Ⅲ组:对照组+CX3CR1中和抗体;Ⅳ组:骨癌痛组+IgG;Ⅴ组:骨癌痛组+CX3CR1中和抗体。术后第10~12天,鞘内分别注射CX3CR1抗体或IgG,1次/d,剂量10μg/10μl。分别于术前及术后隔日开始测定大鼠机械性痛阈值。术后第12天鞘内注射抗体后6 h处死大鼠,测定脊髓小胶质细胞标志物(OX-42)和星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平。结果术后第10天,Ⅲ组与Ⅰ组比较,Ⅳ与Ⅱ组比较,大鼠单次鞘内注射抗体后机械性痛阈值均无明显变化(P >0.05);与Ⅳ组比较,Ⅴ组鞘内注射CX3CR1抗体后2~8 h机械性痛阈值显著增高(P<0.01)。术后第10~12天,与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组机械性痛阈值下降(P<0.01),Ⅲ组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与Ⅱ组、Ⅳ组比较,Ⅴ组机械性痛阈值显著增高(P<0.01)。与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组脊髓OX-42和GFAP染色阳性细胞数(Num)及积分光密度(IOD)均增加(P<0.01);与Ⅱ组、Ⅳ组比较,Ⅴ组脊髓OX-42和GFAP染色Num及IOD减少(P<0.01)。结论鞘内注射趋化因子FKN受体CX3CR1中和抗体减轻骨癌痛大鼠痛觉过敏;鞘内注射CX3CR1中和抗体通过抑制脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞的活化而产生抗痛敏作用。