第一部分雌雄激素比例失衡与绝经后女性冠心病发病风险的相关性研究研究背景和目的：冠心病(CHD)的发生与发展呈现明显的性别差异。近年来,性激素与冠心病发病风险的研究受到临床和基础医学的广泛关注,但结论尚存争议。最新研究显示绝经后女性体内雌激素发挥生理作用必须依赖于正常水平的雄激素,这提示单纯分析雌激素或雄激素与冠心病发病风险的关系,所得的结论较片面。因此,本研究旨在探讨冠心病患者体内雌雄激素比例的变化,并深入分析雌雄激素比例与冠心病相关风险因子的关系。研究方法：本研究选取114名绝经后健康女性(对照组)和124名绝经后女性冠心病患者(疾病组)作为研究对象。利用免疫电化学发光法检测研究对象血清雌二醇、睾酮的浓度,ELISA法检测血清芳香化酶与性激素结合球蛋白的水平,使用全自动生化分析仪检测血脂和超敏C反应蛋白的水平,并深入探讨各指标之间的相互关系。研究结果：对照组血清雌二醇/睾酮比例为5.35±2.78,而在疾病组中其比例显著下降至3.88±2.51(P<0.0001)。多元线性回归分析结果显示,雌二醇/睾酮比例与胆固醇、低密度脂蛋白和动脉粥样硬化指数呈负相关,而与高密度胆固醇和高密度胆固醇/低密度胆固醇呈正相关(P值均<0.0001)。研究还发现雌二醇/睾酮比例与芳香化酶呈负相关(r=-0.192,p=0.032),而与性激素结合球蛋白呈正相关(r=0.938,P<0.0001)。研究结论：本研究证实了绝经后女性冠心病患者血清雌雄激素比例下降,阐明了雌雄激素比例下降与不良血脂组合的密切关系,同时研究还发现雌雄激素比例与芳香化酶成负相关而与SHBG成正相关。综上所述,维持雌雄激素的比例对冠心病的防治有着重要作用,并为雌雄激素联合替代治疗提供了理论基础。第二部分原代人脐静脉内皮细胞中雌雄激素协同作用对内皮细胞凋亡的影响研究背景和目的：基础研究已证实雌激素(主要是雌二醇)和雄激素(主要是睾酮)对血管内皮细胞具有保护作用,包括促进一氧化氮(NO)的生成,抑制粘附分子和趋化因子的表达等。本研究已在血清学水平证实雌雄激素比例降低与冠心病发病风险呈显著正相关,而雌雄激素不同比例会对内皮细胞产生何种影响,是我们亟待解决的下一个问题。本部分的研究主要旨在细胞水平探索在炎症刺激下,可显著修复内皮细胞凋亡的雌雄激素浓度和比例,即最适雌雄激素比例,并深入探讨最适雌雄激素比例对CRP诱导原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡修复作用的机制。研究方法：选取HUVECs作为研究对象。经lOng/ml CRP诱导其凋亡后,给予不同比例和浓度雌雄激素修复,利用MTT法检测细胞凋亡抑制率,western blot检测凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路蛋白。研究结果：MTT实验结果显示,当5×10-8mol/L雌二醇和10-8mol/L睾酮联合作用,即雌二醇/睾酮比例为5：1时,其细胞增殖抑制率明显高于CRP诱导组,且明显优于其他比例和浓度。与对照组相比,单纯CRP刺激组Cleaved caspase3、cleaved PARP和Bax蛋白表达水平明显升高,而当5×10-8mol/L雌二醇和10-8mol/L睾酮联合作用时,上述三种凋亡相关蛋白水平明显降低,且修复作用明显优于单纯雌二醇和单纯睾酮组。CRP诱导后可使HUVECs释放NO量明显减少(P<0.05),单纯E2和单纯T组中NO含量较对照组相比也明显降低,而当给予最适雌雄激素比例联合给药(5×10-8mol/L雌二醇+10-8mol/L睾酮)时,其细胞培养液上清中NO含量较单纯CRP刺激组明显升高。同时5×10-8mol/L雌二醇和10-8mol/L睾酮联合作用可明显降低AKT磷酸化水平,并且在给予PI3K抑制剂后,5×10-8mol/L雌二醇和10-8mol/L睾酮联合作用时的修复凋亡作用减弱。研究结论：本部分研究探索出了可明显抵抗CRP诱导HUVECs凋亡的最适雌雄激素比例,即5×10-8mol/L雌二醇联合10-8mol/L睾酮。最适雌雄激素比例可明显抵抗CRP诱导的内皮细胞凋亡,并促进NO释放,保护内皮细胞功能,且其抗凋亡和内皮保护效应明显优于单纯雌二醇或睾酮的作用。同时本研究还证实了最适雌雄激素比例抗内皮细胞凋亡作用主要是通过PI3K/AKT信号通路发挥效应。第三部分雌雄激素协同作用在早期动脉粥样硬化模型小鼠中的研究研究背景和目的：雌激素替代治疗CHD因其严重的不良反应而被迫终止。近期研究表明雄激素不仅可以保护CHD而且其强大的抗CRP、抗血栓功能可对抗雌激素的不良效应。最新研究显示绝经后妇女体内雌激素发挥生理作用必须依赖于一定浓度的雄激素,这提示在人体内雌雄激素均是重要的激素,单纯的补充一种激素会造成另一种激素缺乏。因此,雌雄激素联合治疗对CHD的防治具有重要意义。前期研究结果也证实雌雄激素协同作用可明显抑制CRP诱导的凋亡相关蛋白的产生。本部分研究旨在动物水平深入探讨雌雄激素联合给药对动脉粥样硬化的疗效,为该疾病的治疗提供新策略。研究方法：建立绝经后小鼠早期动脉粥样硬化模型,将小鼠分为5组：对照组、造模组、单纯雌二醇(1μg/d)给药组、单纯睾酮(7μg/d)给药组和最适雌雄激素比例联合给药(1μg/dE2+7μg/dT)组,通过油红O染色和免疫组化分析主动脉瓣处细胞组成,透射电镜技术检测内皮细胞凋亡,使用全自动生化分析仪检测小鼠血清脂质的水平,使用全自动凝血分析仪检测小鼠血浆凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶原时间(APTT),利用ELISA方法检测小鼠血清TNF-a和IL-6水平。研究结果：在绝经后小鼠早期动脉粥样硬化模型中我们发现,与对照组相比,造模组中主动脉瓣膜处脂质累积明显增多,平滑肌细胞增殖并伴有局势细胞浸润,而当给予雌雄激素联合给药时,与造模组相比,脂质累积明显减少,平滑肌细胞的数量与对照组较一致且无巨噬细胞浸润。而且雌雄激素联合给药组可明显修复高脂饮食诱导的内皮细胞凋亡并下调TNF-a和IL-6水平(P<0.05)。在凝血功能方面,与对照组相比,造模组小鼠PT与APTT明显缩短(P<0.05),单纯E2治疗组中PT明显延长APTT明显缩短(P<0.05)。然而雌雄激素联合治疗组中PT和APTT时间恢复到对照水平,与对照组无差异。研究结论：在动物模型中,雌雄激素联合治疗可有效的减少主动脉瓣膜脂质累积、减少泡沫细胞的形成、抑制内皮细胞损伤、调节凝血功能和抑制炎性反应,而且这些效应明显优于单纯E2或T治疗。这提示在早期动脉粥样硬化模型中E2与T具有协同作用,雌雄激素联合治疗可明显抑制动脉粥样硬化的发展。因此,本研究为绝经后女性应用雌雄激素联合治疗动脉粥样硬化提供了理论依据。