大花金挖耳内生菌分离及其发酵产物抑菌活性研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hhz20091
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大花金挖耳(Carpesium macrocephalum)为菊科天明精属多年生草本植物,研究发现其为一种优秀的杀菌植物。植物内生菌能够产生许多结构新颖、生理活性独特的或与宿主植物相同和相似的天然生理活性物质,同时植物内生菌具有普遍的抑菌活性。基于此,本研究对大花金挖耳内生菌进行了初步研究,主要结果如下:1通过组织块法和匀浆法,采用PDA、牛肉蛋白胨和高氏一号3种分离培养基,从大花金挖耳茎、叶、花、果实和根等组织中分离纯化得到92株内生菌,其中内生真菌68株,内生细菌16株,内生放线菌8株。2对峙法抑菌活性测定表明,大花金挖耳92株内生菌中,对病原真菌小麦赤霉、番茄灰霉、辣椒疫霉、玉米大斑、苹果炭疽具有拮抗活性的菌株占到总菌株数的38.04%、47.83%、36.96%、39.13%、40.22%。采用生长速率法和活体组织法测定22株内生菌发酵产物的抑菌活性,结果表明内生真菌H-18、G-6和内生细菌H-32等3株内生菌的发酵产物具有很好的抑菌作用,并确定内生真菌H-18做为进一步研究的对象。3经多种培养基培养及结合黑光、紫外、低温等不同条件诱导,最后使H-18菌株产生分生孢子,经过经典分类学对比鉴定,H-18菌株为半知菌亚门丛梗孢目镰孢霉属真菌。4结合抑菌活性测定,确定了H-18菌株较为合适的基础发酵条件为:PD培养基,接种后静置48h,温度28℃,摇床转速110r·min-1,发酵时间10-12天。5对H-18进行抑菌活性研究发现,其主要抑菌活性成分存在于菌丝体中。其菌丝丙酮提取物在10.0mg·mL-1剂量下,对番茄灰霉病的防治效果可达54.46%。H-18菌丝体的石油醚、丙酮和甲醇浸膏对番茄灰霉病菌菌丝生长的EC50值分别达到了0.137mg·mL-1、0.0702mg·mL-1、0.0394mg·mL-1。经有机溶剂提取及硅胶柱层析分离,从H-18菌丝体中分离得到四种化合物SD-1、SF-6、BF-9和BE-3,其结构需经进一步鉴定。
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