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本研究以京海黄鸡为试验素材,建立了鸡组织中阿莫西林(AMO)及其代谢物阿莫西林酸(AMA)、二酮哌嗪阿莫西林(DIKETO)和氨苄西林(AMP)同时检测的高效液相色谱串联质谱检测法(HPLC-MS/MS)和超高效液相色谱串联质谱检测法(UPLC-MS/MS),并通过对试验鸡分别以30.0、60.0mg/kg·b.w.d剂量内服AMO,每天给药2次,连续7d,分别研究了鸡组织(肌肉、肝脏和肾脏)中AMO及其代谢物AMA和DIKETO残留消除规律,为动物源性食品中AMO及其主要代谢物和AMP多残留检测标准的制定和养鸡业中科学合理使用AMO、制定休药期以及开发无公害禽产品提供科学依据。主要研究结果如下:1、建立了鸡组织中AMO及其代谢物AMA、DIKETO和AMP多残留同时提取和高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)同时确证检测方法。AMO、AMA、DIKETO和AMP分别在三种不同组织中特定浓度范围内,四种目标分析物的定量子离子与青霉素V内标(PV)定量子离子的峰面积比值与其浓度比值呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)在三种基质中分别高于0.9998、0.9997、0.9989和0.9968。当AMO、AMA、DIKETO和AMP在各组织中定量限添加水平下,鸡肌肉、肝脏和肾脏样品中的AMO、AMA、DIKETO和AMP平均回收率(Recovery)均高于75.20%、79.62%、79.85%和79.65%,相对标准偏差(RSD)分别低于15.73%、16.39%、14.30%和13.91%;当四种分析物的添加水平均为25μg/kg、50μg/kg和100μg/kg时,鸡三种组织样品中的四种分析物的平均回收率(Recovery)范围分别为90.83%-106.32%、83.09%~103.56%、93.52%~104.50%和86.09%-107.62%,即方法的验证参数准确度(Accuracy)的范围分别为-9.17%~+6.32%、-16.91%~+3.56%、-6.48%-+4.50%、-13.91%-+7.62%,相对标准偏差(RSD)分别低于13.72%、14.77%、14.62%和12.03%,日内RSD分别低于11.09%、12.07%、13.73%和14.16%,日间RSD分别低于12.66%、15.39%、15.33%和15.00%;在HPLC-MS/MS检测技术条件下,AMO、AMA、 DIKETO和AMP在三种空白组织中的检测限(LODs)的最高值分别为1.20、2.20、0.46和0.30μg/kg (S/N≥3),定量限(LOQs)4最高值分别为4.50、8.50、1.38和0.90μg/kg(S/N≥10)。2、建立了鸡组织中AMO及其代谢物AMA、DIKETO和AMP同时检测的超高效液相色谱串联质谱检测法(UPLC-MS/MS)。AMO、AMA、DIKETO和AMP分别在三种不同组织中特定浓度范围内,四种目标分析物的定量子离子与青霉素V内标(PV)定量子离子的峰面积比值与其浓度比值呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)在三种基质中分别高于0.9994、0.9999、0.9998和0.9989。当AMO、AMA、DIKETO和AMP在各组织中定量限添加水平下,鸡肌肉、肝脏和肾脏样品中的AMO、AMA、DIKETO和AMP平均回收率(Recovery)均高于72.05%、74.85%、75.43%和79.18%,相对标准偏差(RSD)分别低于16.35%、14.16%、16.08%和14.88%;当四种分析物的添加水平均为25μg/kg、50μg/kg和100μg/kg时,鸡三种组织样品中的AMO、AMA、DIKETO和AMP平均回收率(Recovery)范围分别为84.08%~102.11%、88.85%~104.08%、86.73%~108.13%和84.31%~102.69%,即方法的验证参数准确度(Accuracy)的范围分别为-15.92%~+2.11%、-11.15%~+4.08%、-13.27%~+8.13%和-15.69%~+2.69%,相对标准偏差(RSD)分别低于13.03%、12.33%、12.67%和12.56%,日内RSD分别低于11.77%、14.87%、11.34%和10.59%,日间RSD分别低于10.95%、15.16%、11.27%和12.18%;在UPLC-MS/MS检测技术条件下,AMO、AMA、DIKETO和AMP在三种空白组织基质液中的检测限(LODs)的最高值分别为0.68、1.36、0.07和0.05μg/kg (S/N≥3),定量限(LOQs)的最高值分别为2.72、5.44、0.23和0.25μg/kg (S/N≥10)。3、在HPLC-MS/MS检测技术条件下,研究了京海黄鸡分别以30.0、60.0mg/kg-b.w.d.的剂量,连续7d,每天2次内服AMO后鸡组织中AMO及两种主要代谢物的残留消除规律。鸡肌肉、肝脏和肾脏组织中AMO、AMA和DIKETO的最高残留量均出现在停药后第Od(停药后4h),且各药物分布情况为肾脏>肝脏>肌肉;在停药后4h至停药后1d期间,各药物在三种组织中的残留量迅速下降,且三种组织中残留消除速率情况为肾脏>肝脏>肌肉;在停药前期,检测出组织中AMA代谢物的残留量显著高于药物原形AMO和代谢物DIKETO,药物原形AMO和代谢物DIKETO在同组织中的残留量大体保持一致;停药1d后,各药物在各组织中的残留消除速率明显下降;AMO、AMA和DIKETO在鸡肌肉、肝脏和肾脏中的残留量在休药前期均与给药剂量呈正相关,而对休药后期各分析物在组织中的残留量影响不大。4、参照我国和欧盟药品管理局(EMEA)关于AMO在鸡组织中的最高残留限量的规定,运用休药期软件(WT1.4),休药期的计算应该以AMO及其主要代谢物AMA和DIKETO总残留量浓度值对应的对数转换值来分析线性回归。计算结果显示:阿莫西林正常剂量组和双倍剂量组在鸡肌肉中的理论休药期分别为5.58d和9.58d;在鸡肝脏中理论休药期分别为7.79d和11.82d;在鸡肾脏中理论休药期分别为7.42d和9.38d。建议优质黄羽肉鸡(京海黄鸡)按上述给药剂量时,其休药期(WDT)分别为8d和12d。从保障食品安全方面考虑,建议我国将AMA和DIKETO作为残留标示物进行监测。