论文部分内容阅读
[目 的]通过生物素-链霉亲和素法构建膀胱癌核酸适配体-磁性纳米颗粒(aptamer-MNPs)复合体,鉴定其对膀胱尿路上皮癌细胞的识别能力。并进一步研究其在尿脱落细胞检测中的应用价值。[方法]1.通过细胞流式仪及荧光显微镜检测膀胱癌核酸适配体apt1对膀胱尿路上皮癌EJ细胞的识别与鉴别能力,并通过设立aptl浓度梯度测定其解离系数。2.利用生物素-链霉亲和素法构建膀胱癌aptamer-MNPs复合体,通过白光及荧光显微镜评估其对膀胱尿路上皮癌EJ细胞的识别与鉴别能力。3.评估膀胱癌aptamer-MNPs复合体在尿脱落细胞检测中的价值,选取2019年3月1日—2020年1月1日期间因怀疑膀胱肿瘤至我院就诊的106名患者进行研究。对纳入研究的患者进行传统尿脱落细胞、NMP22、以及膀胱癌aptamer-MNPs复合体检测,比较三种方法用于诊断膀胱尿路上皮癌的价值,膀胱镜+组织活检结果作为判定标准。计算三种方法各自的灵敏度及特异度,运用卡方检验比较三种诊断方法结果与患者病理分级分期之间的关系,综合评估膀胱癌aptamer-MNPs复合体用于膀胱尿路上皮癌诊断的潜在临床运用价值。[结果]1.膀胱癌核酸适配体apt1能特异性的识别EJ细胞,与正常尿路上皮SV细胞、人胚肾293T细胞、胃癌BGC-803细胞等对照细胞无明显结合,其与EJ细胞结合的解离常数为32..86±16.86nM。2.膀胱癌aptamer-MNPs复合体能识别并捕获EJ细胞,在EJ细胞表面有明显的磁珠结合,但SV、293T细胞表明则无明显结合。3.本研究比较了传统尿脱落细胞检测、NMP22检测、膀胱癌aptamer-MNPs复合体检测三种方法在膀胱尿路上皮癌中的诊断价值,膀胱癌aptamer-MNPs复合体检测法拥有和传统尿脱落细胞检测相当的高特异性(94.73%),同时敏感性(73.56%)也优于传统尿脱落细胞检测(47.12%)和NMP22检测(62.06%)。4.本研究采用的传统尿脱落细胞检测、NMP22检测、膀胱癌aptamer-MNPs复合体检测三种方法的检出率均随病理分期的增高而增高,差异具有统计学意义(p<0.05)。5.传统尿脱落细胞检测的检出率随病理分级的升高而升高,差异具有统计学意义(p=0.006)。NMP22法与膀胱癌aptamer-MNPs复合体的检出率随病理分级的升高略微升高,但差异无统计学差异(p>0.05)。[结论]本研究构建的膀胱癌aptamer-MNPs复合体合成简单、经济、可靠,其对膀胱尿路上皮癌具有较高的灵敏度(73.56%)和特异度(94.73%)。同时膀胱癌aptamer-MNPs复合体检测法操作简便、结果直观可靠,有望应用于膀胱尿路上皮癌诊断。