狍成纤维细胞体外培养体系建立及其生物学特性分析

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狍(Capreolus gray),分为东方狍(又称西伯利亚狍,C.pygargus)和西方狍(又称欧洲狍,C.capreolus)两种,分布于我国内蒙古地区的狍属西伯利亚狍,目前该地区狍种群数量急剧减少。本研究旨在建立狍成纤维细胞体外培养体系并分析其生物学特性,在细胞水平保护狍的物种资源,同时构建鹿科动物的系统发育树以探究鹿科动物的亲缘关系。本研究利用组织块贴壁培养法对雄性和雌性狍进行成纤维细胞原代建系,所建细胞系符合成纤维细胞的形态及生长特征。接下来我们对雄性狍三种组织来源的成纤维细胞进行相关生物学特性分析,测定三种组织细胞贴壁率、冷冻前及复苏后细胞存活率,并绘制细胞生长曲线,其中气管和耳朵来源成纤维细胞呈典型“S”型。三种组织来源细胞用H&E染色后可观察到细胞呈漩涡状生长,细胞形态为梭形、三角形或不规则形,是典型的成纤维细胞形态。雄性和雌性狍染色体核型及G带分析结果显示狍染色体条数为2n=70(包含一对XY/XX),成纤维细胞系染色体数量及形态正常,具有遗传稳定性。成纤维细胞系转染绿色荧光蛋白质粒(p EGFP-C1)效率在12 h时均大于20%,转染红色荧光蛋白质粒(H2B-CAG-td Tomato)后经过筛选得到可以长期稳定表达红色荧光蛋白的气管和耳朵成纤维细胞系。本研究基于5个联合基因分析构建了21种鹿科动物的系统发育树,可以直观显示鹿科动物亲缘关系,其中西伯利亚狍与驯鹿亲缘关系较为密切。本研究成功建立了雄性和雌性狍三种组织来源的成纤维细胞系,首次绘制了雄性和雌性狍染色体核型及G带图谱,构建了21种鹿科动物的系统发育树。本研究获得的狍遗传资源与信息最终录入内蒙古高原动物遗传资源信息库,实现了对野生动物遗传资源的保护,为将来更深入的研究物种多样性提供数据及材料的支持。
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