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背景与目的:肺癌是全球范围内发病率及死亡率最高的恶性肿瘤,其严重威胁着全国乃至全球人类的身心健康。其中,肺腺癌(lung adenocarcinoma,LADC)是肺癌中最为常见的病理学表型。由于其发病机制复杂,缺乏早期特异性临床表现,多数患者就诊时已处中晚期,五年生存率往往不足20%。因此,不断研究肺癌的恶性生物学行为,深入阐明其发生发展机制,从而进一步优化其诊治策略具有十分重要的意义。MicroRNAs(miRNAs)作为一类高度保守的非编码单链RNA分子,参与肿瘤的多种包括细胞增殖、侵袭转移、凋亡在内的恶性生物学行为。其中miRNA-326(miR-326)作为一种抑癌基因在多种恶性肿瘤中发挥作用,但其在LADC中的表达情况以及作用机制尚不清楚。本研究旨在探索miR-326在LADC中的表达情况以及在细胞增殖、侵袭、转移与凋亡等过程中的功能,为寻找LADC潜在诊治靶点提供新的研究方向。方法:应用实时定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-326在20例LADC患者肿瘤组织及相应正常组织,正常人支气管上皮细胞(HBES-2B)以及LADC细胞(H23、H1975、H2228及H2085)中的表达情况。采用瞬时转染H23细胞,经qRT-PCR和western blot验证转染效率,构建miR-326过表达、ZEB1(zinc-finger-enhancer binding protein 1)敲低和ZEB1、miR-326同时敲低的细胞株。分别应用CCK-8实验、transwell侵袭实验、划痕实验和流式细胞术实验探讨miR-326过表达、ZEB1敲低和ZEB1、miR-326同时敲低后对H23细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡能力的影响。采用western blot探讨过表达miR-326后对H23细胞中EMT(Epithelial-mesenchymal transition,上皮间质转化)相关蛋白N-cadherin、E-cadherin、MMP7、MMP13、SLUG以及凋亡相关蛋白PARP、BAX的影响;探讨ZEB1敲低和ZEB1、miR-326同时敲低后对H23细胞中EMT相关蛋白以及凋亡相关蛋白的影响。机制上,应用荧光素酶报告基因系统检测miR-326与ZEB1的靶向作用。结果:1.miR-326在LADC组织及肺腺癌细胞系中的表达明显低于正常组织及HBES-2B。2.CCK-8实验显示:过表达miR-326或敲低ZEB1能减弱H23细胞的增殖活性,而同时敲低miR-326和ZEB1后H23细胞增殖活性增强。3.Tranwell侵袭实验和划痕实验显示:过表达miR-326或敲低ZEB1后H23细胞转移能力降低,伤口愈合率减慢;同时敲低miR-326和ZEB1后H23细胞通过transwell小室侵袭细胞增多,伤口愈合率加快。4.Western blot实验显示:过表达miR-326以及敲低ZEB1后H23细胞中侵袭迁移相关蛋白N-cadherin、MMP7、MMP13、SLUG的表达下调,侵袭迁移相关蛋白E-cadherin以及凋亡相关蛋白PARP、BAX的表达上调;同时敲低miR-326和ZEB1后H23细胞中侵袭迁移相关蛋白N-cadherin、MMP13的表达上调,侵袭迁移相关蛋白E-cadherin以及凋亡相关蛋白PARP、BAX的表达下调。5.双荧光素酶报告基因结果显示:miR-326可与ZEB13,-UTR区域特异性结合。结论:MiR-326靶向ZEB1能抑制LADC细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,从而发挥抑癌作用,有望成为LADC新的诊治靶点。