金棚一号番茄杂种种子纯度检测的SCAR标记研究

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番茄是我国的主栽蔬菜之一,其种子的纯度及真实性对于整个番茄产业链的良性发展很重要。为了与国际市场接轨,也为了保护农民的合法权益,必须研究准确、快速的杂种纯度鉴定方法。影响番茄商品杂交种子纯度的主要原因是母本自交产生的假杂种。本文在研究金棚一号杂种番茄叶片RAPD标记的基础上,将其转化为SCAR标记,并进一步以单粒干种子为试材,成功创建了能检测金棚一号番茄杂种种子纯度的分子标记检测体系。比较4种叶片基因组DNA提取方法,并分别提取叶片基因组DNA,经RAPD及SCAR扩增,其中巩振辉的方法扩增效果较好,比较好的解决了番茄DNA提取中易褐化的问题。摸索并完善了番茄干种子DNA提取方法,并将其运用到SCAR技术检测金棚一号番茄杂种种子纯度的工作中。摸索RAPD反应体系的各个影响因素,优化构建了稳定的RAPD反应体系;对特异片段S130771和S296943进行克隆和测序;将这两个特异片段转化为SCAR标记并设计两对SCAR引物;引物RF2/FF2对金棚一号番茄父本和子代种子DNA的PCR扩增结果与RAPD标记S130771的分离结果相一致,最终获得一个能运用到金棚一号番茄杂种种子纯度鉴定的SCAR标记S130771。建立了以干种子为试材能检测金棚一号番茄杂种种子纯度的SCAR标记检测体系,并以100粒籽粒饱满的金棚一号番茄干种子为材料,成功率为85%。
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