【摘 要】
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目的:观察清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤后神经细胞凋亡和凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达水平的影响,从细胞凋亡角度揭示清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤神经元保护作用的可能机制。方法:将240只成年健康雄性SD大鼠,体重250±50g,按随机数字表法将大鼠分为N1、N2两大组（每大组120只大鼠）,然后将每个大组按同样的方法分为4个小组,即空白组（A组30只）、假手术组（B组30只）、模型组
【基金项目】
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国家自然科学基金（项目批准号:NO.81460725）；
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目的:观察清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤后神经细胞凋亡和凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达水平的影响,从细胞凋亡角度揭示清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤神经元保护作用的可能机制。方法:将240只成年健康雄性SD大鼠,体重250±50g,按随机数字表法将大鼠分为N1、N2两大组（每大组120只大鼠）,然后将每个大组按同样的方法分为4个小组,即空白组（A组30只）、假手术组（B组30只）、模型组（C组30只）和清脑益元组（D组30只）。每个小组分别按术后取材时间点分为1d、3d、7d、14d、28d五个亚组。分别作如下处理:A组正常饲养,灌胃等体积蒸馏水;B组行假手术,颈总动脉插线8-10mm;C组行MCAO术,两组术后灌胃等体积蒸馏水;D组预灌胃等体积清脑益元汤7d后行MCAO术。参考Longa的5分制法对大鼠神经功能缺损症状进行评分,并按各时间点进行标本采集。取材后,应用TUNEL法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区细胞凋亡;免疫组织化学法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区Bcl-2、Bax阳性细胞表达;Western blot法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区Bcl-2、Bax蛋白表达水平;RT-q PCR法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区Caspase-3m RNA表达水平。用SPSS24.0统计学软件进行数据统计及结果分析。结果:同一时间点的组间比较结果:（1）空白组与假手术组大鼠未见神经功能缺损情况,两组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组和清脑益元汤组大鼠神经功能缺损评分显著提高（P＜0.01）;与模型组相比,清脑益元汤组的神经功能缺损有明显降低趋势（P＜0.01）;（2）空白组和假手术组可见零星、散在的阳性凋亡细胞表达,两组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组和清脑益元汤组TUNEL阳性凋亡细胞均明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,清脑益元汤组TUNEL阳性凋亡细胞明显降低（P＜0.01）;（3）空白组和假手术组各时间点Bcl-2、Bax阳性细胞表达无明显变化,两组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组和清脑益元组Bcl-2阳性细胞表达明显降低（P＜0.01）、Bax阳性细胞表达明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,清脑益元组Bcl-2阳性细胞表达明显升高（P＜0.01）,Bax阳性细胞表达明显降低（P＜0.01）;（4）空白组和假手术组各时间点Bcl-2、Bax蛋白表达处于相对平稳的状态,两者比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组和清脑益元汤组Bcl-2蛋白表达明显降低（P＜0.01）、Bax蛋白表达明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,清脑益元组Bcl-2蛋白表达水明显升高（P＜0.01）,Bax蛋白表达明显降低（P＜0.01）;（5）空白组Caspase-3m RNA表达处于一个相对平稳的状态,假手术组略有上升,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组和清脑益元汤组Caspase-3m RNA表达显著升高,差异有显著性差异（P＜0.01）;与模型组相比,清脑益元组Caspase-3m RNA表达明显降低（P＜0.01）。结论:1.清脑益元汤可明显改善MCAO模型大鼠神经功能缺损程度,促进其肢体功能的恢复。2.清脑益元汤能够有效减轻MCAO模型大鼠脑组织缺血侧区域神经细胞的凋亡。3.清脑益元汤对MCAO模型大鼠具有一定的神经保护作用,其作用机制可能通过上调Bcl-2和下调Bax、caspase-3表达来抑制神经元凋亡,从而发挥其防治脑缺血损伤的作用。
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