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目的:复方丹参方被广泛用于治疗心血管疾病。近年来,实验及临床研究提示:复方丹参具有神经保护作用。因此本研究探讨复方丹参方的神经细胞保护作用机制,以期明确该复方成分与神经细胞靶分子的对应关系。方法:本研究以氧化因子6-羟基多巴胺(6-OHDA)引起的神经细胞损伤和凋亡为模型,考察复方丹参方活性单体对6-OHDA引起的SH-SY5Y细胞凋亡及相关药理学指标的影响,分析其作用机制。通过培养人神经瘤母细胞(SH-SY5Y),观察了6-OHDA (100μmol/L,24小时)诱导损伤后SH-SY5Y细胞活力、胞内离子水平等的变化情况以及复方丹参方单体对氧化损伤的保护作用。结果:通过帕金森病细胞模型进行具有神经保护活性单体成分的初步筛选,从30多种复方丹参方单体成分中筛选出有3种具有神经保护活性的单体,活性筛选结果表明人参皂苷Rg1、异龙脑(Iso)、Sal B保护作用明显,Rg1已有广泛深入的的神经保护作用机制研究,我们主要考察(±)异龙脑和丹酚酸B的神经保护作用及其作用机制。Sal B显著的抑制6-OHDA导致的活性氧族物质的产生(reactive oxygen species, ROS) ,抑制6-OHDA导致的细胞内钙浓度升高。Heochest 33258染色和AnnexinⅤ-FITC/PI定量检测实验发现,Sal B抑制6-OHDA导致的凋亡,且呈现出剂量依赖关系。进一步对相关信号转导通路进行检测的结果表明:Sal B抑制6-OHDA导致的caspase-3活性升高,抑制cytochrome c从线粒体到胞质的移位。Sal B抑制6-OHDA导致的Bcl-2/Bax比率的降低。此外,Sal B抑制6-OHDA导致的细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, p-ERK)活性的降低,抑制6-OHDA导致的蛋白激酶C (protein kinase C, PKC)活性的降低。异龙脑(Isoborneol, Iso)显著的抑制6-羟基多巴胺导致的ROS的产生,抑制6-OHDA导致的细胞内钙浓度升高。此外,Iso剂量依赖地抑制6-OHDA导致的凋亡。对相关信号转导通路深入研究的结果表明:Iso抑制6-OHDA导致的caspase-3活性升高,抑制cytochrome c从线粒体到胞质的移位。Iso抑制6-OHDA导致的Bcl-2/Bax比率的降低。此外,Iso抑制6-OHDA导致的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, p-JNK)的激活,Iso抑制6-OHDA导致的p-ERK活性的降低,抑制6-OHDA导致的PKC活性的降低。综上所述,Sal B和Iso的神经保护作用可能与其抗氧化作用和调节细胞内钙平衡作用有关,其作用机制可能与其清除自由基和阻断凋亡信号通路有关。结论:通过实验发现复方丹参方中活性单体可以通过抑制氧化应激反应(oxidative stress)和细胞凋亡发挥神经保护作用,为研究该方内组分神经保护作用的靶点提供了更为深入的资料,有助于揭示复方丹参方神经保护作用的物质基础和作用途径;在中药复方作用机制的阐释方面作出了有益的尝试。