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研究背景:目前胃癌是全球常见肿瘤之一,其发病率居第五位,胃癌是全球癌症相关死亡的第三大主要原因。治疗后转移和复发仍是胃癌治疗的一大挑战。对胃癌侵袭转移机制的研究有助于进一步了解胃癌的发生发展,为胃癌的控制提供新的理论依据。MUC16可表达于胰腺癌、食管癌、结肠癌,胃癌组织。MUC16的胞外部分经过蛋白酶酶切之后脱离细胞膜,进入到血清或细胞外是目前临床上检测的CA125。MUC16在肿瘤的生长,增殖,侵袭转移中起了重要的促进作用。MUC16与间皮素相互结合促进卵巢癌腹膜转移,MUC16胞内段参与的信号通路促进肿瘤的转移。循环肿瘤细胞在肿瘤的转移过程有重要作用,循环肿瘤细胞微栓的恶性程度高于单个循环肿瘤细胞。大部分IV期胃癌患者有淋巴结转移或腹膜转移,目前尚无MUC16在胃癌中的作用及机制研究,及MUC16与循环肿瘤细胞相关性的研究。研究目的:基于以上研究结果,本研究拟探讨MUC16对胃癌侵袭转移的影响及具体机制。本研究有望为胃癌的诊疗提供新的理论依据,加深对胃癌发生发展转移的理解。研究方法:本实验采用免疫组化检测MUC16表达,分析其与临床病理特征、预后之间的关系。免疫荧光、Western blot、实时荧光PCR检测MUC16在胃癌细胞系及胃正常上皮细胞的表达。采用质粒敲降MUC16的表达或过表达MUC16的C末端268个氨基酸片段后,通过划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、小鼠肺转移模型的建立、外周血循环肿瘤细胞的检测研究胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化,肺转移灶形成以及外周血循环肿瘤细胞的变化。采用转录组测序筛选MUC16的下游调控分子。下游调控分子敲降后观察胃癌细胞迁移侵袭能力的变化。免疫共沉淀实验验证MUC16的C末端的互作分子。通过Western blot检测研究MUC16具体的信号调节通路。采用膜过滤法检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞,分析MUC16的表达与循环肿瘤细胞的关系。研究结果:免疫组织化学染色显示胃癌组织MUC16表达高于癌旁组织。MUC16表达与N分期、TNM分期、分化程度相关。MUC16阳性与胃癌患者较短的OS相关。免疫荧光、Western blot、实时荧光PCR检测显示MUC16的表达在胃癌细胞系高于胃粘膜正常上皮细胞。MUC16的敲低可显著降低胃癌细胞的迁移和侵袭能力,减少小鼠外周血循环肿瘤细胞微栓的数目;MUC16的C末端268个氨基酸片段过表达后可提高胃癌细胞的迁移和侵袭能力。转录组测序结果显示NTS在MUC16敲低之后下调最明显。下调NTS的表达降低胃癌细胞的侵袭迁移能力。免疫共沉淀实验显示MUC16的C末端与JAK2相互结合。Western blot检测显示MUC16通过JAK2-STAT3-cJUN信号通路调节NTS的表达。胃癌患者循环肿瘤细胞的检测结果显示胃癌原发灶、淋巴结转移灶MUC16阳性与CTC数目的升高呈正相关。研究结论:以上研究表明胃癌MUC16可能通过JAK2-STAT3-cJUN信号通路促进NTS的表达,导致胃癌细胞迁移侵袭能力的增强,肿瘤细胞更易进入外周血。本实验首次阐述MUC16对胃癌细胞侵袭转移特性的影响及其机制,为粘蛋白介导胃癌细胞的转移提供了新的理论依据,为胃癌转移的诊疗提供了研究基础。