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牙髓干细胞(Dental Plup Stem Cells,DPSCs)是存在于牙髓组织中具有干细胞性质的未分化间充质细胞,具有多向分化潜能,可形成功能性的成牙本质细胞和牙本质。胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是促细胞生长作用很强的多肽因子,又是重要的致有丝分裂原,在牙齿发育中对细胞的增殖和分化起重要作用。研究发现,IGF-1可能在牙髓细胞增殖和分化过程中起重要作用,bFGF也有明显地刺激体外培养的人牙髓细胞增殖的作用,因而日益受到人们的重视。体外组织诱导培养实验表明,aFGF或bFGF单独应用不能诱导牙乳头细胞向成牙本质细胞的功能性分化,而IGF-1与bFGF有协同作用,联合应用IGF-1和bFGF可引起表层细胞的极化和向成牙本质细胞的功能性分化,并分泌细胞外基质。而IGF-1和aFGF的同时应用只能使细胞突起伸长,基质沉积较少见,aFGF或bFGF与TGF-β1的联合应用可使牙乳头表层细胞发生极化,但基质的沉积仅限于少数样本。因此认为,IGF-1与bFGF联合应用可增强彼此的诱导功能,从而引起牙乳头细胞发生向成牙本质细胞的功能性分化。IGF-1、bFGF是否能促进DPSCs的增殖和分化?目前有关这一问题的研究报道较少。本课题在对人牙髓干细胞体外分离、培养和鉴定的基础上,进一步分析IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞生长特性的影响,为探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。目的:研究IGF-1与bFGF单独与联合作用对体外培养的DPSCs的增殖和分化作用的影响。方法:1.细胞培养及鉴定:牙髓干细胞来源于临床上因正畸或阻生而拔除的健康牙,采用酶消化法分离获得,进行原代培养;观察DPSCs的生长状态、细胞形态及其变化;细胞克隆形成率;碱性磷酸酶染色;免疫组化及RT-PCR法检测细胞表型。2.细胞增殖检测:取第3～5代DPSCs,用不同浓度的生长因子刺激,四甲基偶氮唑盐(MTT)法于波长490nm测得测光密度值(OD值)。