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目的:本课题通过建立形觉剥夺型近视BN大鼠模型,探讨不同浓度阿托品滴眼液对近视发生发展的防控效果及其可能作用机制;本课题还通过LC-MS/MS分析方法测定滴眼给药后不同时间节点血浆以及兔眼各亚组织的阿托品浓度,探讨阿托品经滴眼给药后其在眼内和全身的药代动力学特点,为探讨作用机制以及可能的全身毒性反应提供参考。方法:建立形觉剥夺型近视BN大鼠模型:动物麻醉、消毒和护理后,用不可吸收缝合线缝合提前准备好的透光不透明眼罩于左眼眼周皮肤并完全覆盖左眼,调节塑料项圈大小,阻止大鼠破坏眼罩。用胰岛素注射针抽取并滴注50μL相应浓度阿托品滴眼液于造模眼,空白对照组和模型对照组用相同方式给予同容量的聚乙烯醇滴眼液,完成每天一次、持续7周的给药。造模及给药结束后,借助A超、带状光检影镜、Diagnosys Celeris动物电生理仪、眼底成像仪和OCTA分别检测所有动物的眼轴、屈光度、ERG、视网膜和脉络膜血管血流;H-E染色测量巩膜厚度,免疫荧光染色、RT-q PCR分析和Western Blot分析检测视网膜和巩膜上HIF-1α、VEGF、α-SMA、m TOR、Epo-1和TGF-β的基因含量和蛋白表达量。组织分布实验以青紫蓝兔为实验对象。单次经滴眼给药给予青紫蓝兔0.05%阿托品50μL/眼,分别采集给药后0.5 h、1 h、2 h、4 h、24 h和72 h等6个时间点所有动物的血浆及角膜、房水、虹膜、晶状体、玻璃体、视网膜、脉络膜、巩膜和结膜,按眼组织质量:溶液体积=10 mg:100μL加入匀浆液匀浆备存,与血浆一起,采用LC-MS/MS分析方法测定阿托品含量。结果:近视造模眼分别经滴眼给药给予0.01%阿托品和0.025%阿托品7周后,其眼轴延长程度、屈光降低幅度均有所缓解,且0.025%剂量组动物眼轴延长程度、屈光降低程度小于0.01%剂量组。与正常大鼠相比,形觉剥夺型近视BN大鼠视网膜厚度变化不明显,而视网膜和脉络膜血流量具有增多趋势。与模型对照组相比,给药后,两组0.05%剂量组大鼠的视网膜和脉络膜血流量减少。与正常大鼠相比,近视大鼠巩膜变薄,给药后巩膜有所增厚。造模及给药7周后,0.01 cd.s/m光刺激下,与空白对照组相比,模型对照组的a-wave和b-wave的波动幅度更小,且差异具有极显著性（P＜0.01）;与模型对照组相比,0.01%剂量组大鼠的a-wave显著降低（P＜0.05）,0.025%剂量组大鼠的a-wave极显著降低（P＜0.01）,两组0.05%剂量组大鼠的b-wave差异不具有显著性差异（P≥0.05）。0.1 cd.s/m刺激下,与空白对照组相比,模型对照组的a-wave的波动幅度更小（P＜0.01）,b-wave无显著性差异（P≥0.05）;与模型对照组相比,0.01%剂量组大鼠a-wave和b-wave均无显著性差异（P≥0.05）,0.025%剂量组大鼠a-wave极显著降低（P＜0.01）而b-wave有升高27%的趋势（P≥0.05）。1.0 cd.s/m刺激下,不同处理组之间的a-wave和b-wave均无显著性差异（P≥0.05）。不同处理组动物在同一光刺激强度下的Ops均无显著性差异（P≥0.05）。造模及给药7周后,视网膜相关基因及蛋白表现如下:与空白对照组相比,模型对照组动物视网膜上HIF-1α、VEGF和α-SMA基因含量更多,且差异具有极显著性（P＜0.01）;TGF-β、m TOR和EPO基因含量水平无显著性差异（P≥0.05）,但存在升高趋势。与模型对照组相比,0.01%剂量组动物视网膜上HIF-1α基因含量显著降低（P＜0.05）,VEGF、α-SMA、TGF-β和m TOR基因含量水平无显著性差异（P≥0.05）,但存在降低趋势;0.025%剂量组动物视网膜上HIF-1α、VEGF、α-SMA和EPO显著下降（P＜0.05）,TGF-β和m TOR基因含量水平无显著性差异（P≥0.05）,但存在降低趋势。Western Blot检测中,各处理组动物视网膜上HIF-1α、VEGF、α-SMA和TGF-β蛋白表达情况与RT-q PCR一致。造模及给药7周后,巩膜相关基因及蛋白表现如下:与空白对照组相比,模型对照组动物巩膜上HIF-1α、VEGF、α-SMA和TGF-β基因含量水平无显著性差异（P＞0.05）,除HIF-1α表现为降低外,其余三个基因含量均有升高趋势。与模型对照组相比,0.01%剂量组和0.025%剂量组动物巩膜上VEGF、α-SMA和TGF-β基因含量水平无显著性差异（P≥0.05）,但呈下降趋势,且随着药物浓度的增高趋势越明显。与空白对照组相比,模型对照组动物巩膜上HIF-1α、VEGF和α-SMA显著增多（P＜0.05）。与模型对照组相比,0.01%剂量组动物巩膜上α-SMA蛋白表达量相对降低,HIF-1α和VEGF也有一定的降低趋势（P≥0.05）;0.025%剂量组BN大鼠巩膜上HIF-1α和α-SMA蛋白表达量显著性降低（P＜0.05）,VEGF蛋白表达量也有一定的减少趋势（P≥0.05）。LC-MS/MS检测方法检测阿托品在青紫蓝兔眼组织及血浆内的含量实验中,采用液相梯度洗脱,以甲苯磺丁脲为内标,定量下限为0.5 ng/m L。滴眼给予青紫蓝兔0.05%阿托品后,给药后半小时至一小时,阿托品在青紫蓝兔上的分布以角膜最高,剩下依次为虹膜、房水、脉络膜、结膜、巩膜和晶状体,而玻璃体和视网膜未检出阿托品。2-4 h,各组织内阿托品含量关系为:虹膜＞角膜＞脉络膜＞房水＞结膜＞晶状体＞巩膜＞视网膜、玻璃体（未检出）;4 h后,各组织内阿托品含量关系为:虹膜＞脉络膜＞角膜＞晶状体＞巩膜、结膜＞视网膜、玻璃体（未检出）。血浆内阿托品含量的达峰时间在1 h之前,之后随着时间的增长而降低直至低于检测下限,其最高含量约占角膜上最高含量的1/25;青紫蓝兔的角膜、房水、结膜和巩膜内阿托品达峰时间在给药后0.5 h前;虹膜和脉络膜内阿托品达峰时间在给药后2-4 h;晶状体内阿托品达峰时间在给药后1-4 h;阿托品在虹膜和脉络膜上的保留时间最长,可达到72 h,提示着阿托品可能不仅仅作用于眼前段的睫状肌上,还可能作用于脉络膜上进而延缓近视进展。结论:1.BN大鼠通过佩戴透光不透明眼罩的方法可以形成一定程度近视,具体表现为眼轴延长、屈光降低、视网膜电生理a-wave和b-wave波动幅度减少。2.造模同时给予阿托品滴眼液可以防止近视程度加深,且0.025%阿托品滴眼液防控效果优于0.01%阿托品滴眼液。阿托品滴眼液可以减缓近视大鼠在诱导近视条件下的视网膜和脉络膜血管血流异常增多,可能通过减少视网膜和巩膜上HIF-1α、VEGF、α-SMA和TGF-β等基因及蛋白表达量的途径来降低巩膜延展性、维持巩膜厚度在正常范围内,进一步延缓近视进展,从而达到防控近视加深的效果。3.0.05%阿托品经滴眼的方式进入动物眼球内部,可在虹膜和脉络膜上保留至少72 h,结合OCTA所得各处理组动物脉络膜血流情况,我们认为阿托品可能也会作用在脉络膜上,但是这一作用机制尚不明确,需要深入研究。