论文部分内容阅读
第一部分:老年糖尿病认知功能降低(DACD)大鼠模型构建目的:构建老年糖尿病认知功能降低(Diabetes-Associated Cognitive Decline,DACD)大鼠模型,为后续研究提供良好的动物模型。方法:体重440-500g,18-20月龄的雄性SD大鼠80只,按随机数字表随机分为正常对照组(A组,n=40)和糖尿病模型组(B组,n=40)。A组大鼠正常饮食,B组大鼠采用高脂饲料喂养复合腹腔注射1%链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)(35mg/kg)的方法制备2型糖尿病动物模型。STZ注射后72小时的随机血糖(29)16.7mmol/L的大鼠可判定造模成功。两组大鼠继续上述喂养8周后,采用Morris水迷宫评估认知功能。结果:1.高脂饲养4周后,B组大鼠体型肥胖,体重显著高于A组(p(27)0.01)。2.腹腔注射STZ 72小时后,B组大鼠随机血糖显著高于A组(p(27)0.01)。3.腹腔注射STZ 8周后,与A组大鼠比较,B组大鼠的逃避潜伏期延长,穿越原平台位置次数减少,差异有统计学意义(p(27)0.05)。结论:高脂饲养复合腹腔注射小剂量1%链脲佐菌素成功建立2型糖尿病动物模型。随着病程的延长,动物出现行为学改变,通过学习记忆能力测试可以判断老年DACD大鼠模型制备成功。第二部分:七氟烷对老年DACD大鼠认知功能的影响及mTOR/Grb10通路的作用目的:探讨七氟烷对老年糖尿病认知功能降低(Diabetes-Associated Cognitive Decline,DACD)大鼠认知功能的影响以及海马mTOR/Grb10信号通路的作用机制。方法:将96只老年DACD大鼠按随机数字表随机分为4组(分别n=24)。实验时将老年DACD大鼠置入自制气体麻醉箱吸入3%七氟烷或者氧气3h,实验前2天腹腔注射雷帕霉素溶液(20mg/kg)或者等体积溶剂(DMSO),每天1次,持续至实验后4天。1.空白对照组(CON组):腹腔注射等体积DMSO,吸入氧气3h;2.雷帕霉素对照组(RAP组):腹腔注射雷帕霉素溶液,吸入氧气3h;3.七氟烷组(SEV组):腹腔注射等体积DMSO,吸入3%七氟烷3h;4.雷帕霉素+七氟烷组(RAP+SEV组):腹腔注射雷帕霉素溶液,吸入3%七氟烷3h。实验后第1天和第7天各组分别取12只大鼠进行连续5天的认知功能测试,测试结束后立即取材,检测海马神经元凋亡水平、mTOR、p-mTOR、Grb10、p-Grb10蛋白表达和Grb10 m RNA表达。结果:1.逃避潜伏期:实验1天后,与CON组和RAP+SEV组比较,SEV组大鼠逃避潜伏期显著延长(p(27)0.01);与CON组和RAP+SEV组比较,RAP组大鼠逃避潜伏期明显缩短(p(27)0.01)。穿越原平台位置次数:与CON组和RAP+SEV组比较,SEV组大鼠穿越原平台位置次数显著减少(p(27)0.05);与CON组和RAP+SEV组比较,RAP组大鼠穿越原平台位置次数明显增加,差异有统计学意义(p(27)0.05)。实验7天后,各组大鼠在逃避潜伏期和穿越原平台位置次数上没有统计学意义(p(29)0.05)。2.海马mTOR、Grb10磷酸化水平:实验后第5天,与CON组和RAP+SEV组比较,SEV组大鼠mTOR、Grb10的磷酸化水平均上升,差异均有统计学意义(p(27)0.01)。与CON组和RAP+SEV组比较,RAP组大鼠mTOR、Grb10的磷酸化水平降低,差异均有统计学意义(p(27)0.05)。第11天各组大鼠mTOR、Grb10的磷酸化水平未见显著性差异(p(29)0.05)。3.海马神经元凋亡水平:实验后第5天,与CON组和RAP+SEV组比较,SEV组大鼠TUNEL染色阳性细胞数占总细胞数的比例显著升高(p(27)0.01)。与CON组和RAP+SEV组比较,RAP组大鼠TUNEL染色阳性细胞数占总细胞数的比例显著减少(p(27)0.05)。第11天各组大鼠TUNEL染色阳性细胞数占总细胞数的比例未见显著性差异(p(29)0.05)。4.海马Grb10 m RNA表达:在实验后第5天和第11天,各组大鼠Grb10m RNA表达均未见显著性差异(p(29)0.05)。结论:1.七氟烷麻醉后短期内加重老年DACD大鼠认知功能障碍,雷帕霉素能减轻其程度。2.七氟烷加重老年DACD大鼠认知功能障碍,可能与海马区mTOR/Grb10通路的活性上调有关。