镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆及表达

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蜱是一类专性吸血的体外寄生虫,分布广泛,是许多人和动物重要疾病的传播媒介,经蜱传播的病原体有细菌、病毒、真菌、立克次体、螺旋体以及原虫,不仅给畜牧业造成很大的经济损失,同时还影响人类健康。目前世界上约有820多种蜱,我国发现的蜱有110多种,镰形扇头蜱是我国南方的优势蜱种,主要传播牛巴贝斯虫病、马巴贝斯虫病和吉氏巴贝斯虫病。蜱及蜱传播疾病引起的经济损失十分巨大,到目前为止,免疫防治被认为是最有潜力的防治策略,而寻找敏感、长效、安全的抗原基因是免疫防治的前提条件。IgG结合蛋白(IgG binding protein,IGBP)是蜱体内的一种重要蛋白质,主要存在于蜱的血淋巴和唾液腺中,可以结合进入蜱血淋巴中的宿主免疫球蛋白,避免了宿主免疫球蛋白对蜱内部嚣官的损害,有些种类的IGBP具有雄性特异性,是雄蜱协助雌蜱顺利完成吸血所必不可少的,IGBP是蜱体内一种具有疫苗潜力的功能分子。 本实验以镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消减杂交cDNA文库中的EST数据为基础,应用RACE方法从镰形扇头蜱体内克隆出一个IGBP基因的全长序列,该基因全长683bp,编码178个氨基酸,预测分子量为19.5kDa,经同源性比较该基因与具尾扇头蜱的IGBP-MB基因序列的同源性高达92%。用RT-PCR方法分析了该基因表达的性别特异性、各个器官、各个发育阶段的表达情况,结果表明,该基因表达没有性别特异性;IGBP基因在唾液腺、壳这两个器官有所表达,但在肠中却没有表达;在蜱的各个发育阶段均有表达。成功构建了重组表达载体,并转化到表达菌BL21中,经IPTG诱导,结果表明IGBP可以在原核表达系统中高效表达,应用GST融合蛋白纯化系统,可获得纯化的目的蛋白;探讨了ELISA方法检测重组蛋白结合宿主IgG活性的试验。 综上所述,本研究首次克隆、表达了镰形扇头蜱。IgG结合蛋白基因,分析它的表达特点,并对其功能进行了初步研究,为该基因的进一步研究打下基础。
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