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背景乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引发的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB),已经成为危害全球人类健康的主要传染病之一。目前,控制HBV诱导的肝脏损伤已经成为我们的紧要任务和最终目标,而有效的抗病毒药物是我们达到最终目标的桥梁。替比夫定(telbivudine,L-DT)从2006年研发以来,作为一种核苷(酸)类似物(nucleos(t)ide analogs,NAs)被应用到抗HBV治疗CHB中。全球多中心研究显示对CHB伴轻度肾功能不全的患者,在经过L-DT抗HBV治疗48周以上,肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)较基线水平显著升高,但具体作用机制尚不明确。目的探究L-DT对大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)的增殖有无影响,进一步研究L-DT对RMCs上与肾小球血流量以及滤过功能密切相关的血管紧张素Ⅱ1a受体(Angiotensin type 1a receptor,ⅡAT1aR)在表达上是上调还是下调。为进一步研究L-DT提高患者肾小球滤过功能可能的相关分子机制,提供一定的实验依据。方法体外经消化、传代常规培养后,选用处于对数生长期的RMCs进行实验。计数RMCs 5×104个/mL,按每孔100ul体积内含5000个RMCs,均匀接种于3块96孔细胞培养板内。依据L-DT药物浓度的不同设立空白对照组(L-DT 0mmol/L)和实验组(L-DT 1、10、40、60、100、150mmol/L),对RMCs分别作用24、48、72h。随后采用4-甲基偶氮唑蓝(thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同药物浓度作用不同时间后细胞的吸光度(optical density,OD),计算出L-DT对RMCs增殖半数抑制的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。通过半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测空白对照组以及根据IC50而设立的L-DT低(10mmol/L)、中(50mmol/L)、高(100mmol/L)三个不同浓度组RMCs上AT1aRmRNA表达量的情况。将半定量RT-PCR产物进行凝胶电泳成像,选用β-actin为内参,应用Image-J软件对条带灰度值进行测量,用AT1aR/β-actin的灰度值比值表示AT1aRmRNA相对表达量。数据录入SPSS 19.0统计软件分析。本实验数据为计量资料以均数±标准差(x±s)表示,方差的齐性检验用Levene检验法,组间比较使用ANOVA方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果L-DT实验组中的RMCs随药物浓度以及作用时间的增加出现皱缩,核缩成点状,甚至有胞质空泡。MTT法提示实验组中RMCs经不同L-DT浓度(1、10、40、60、100、150mmol/L)作用24、48、72h后,通过计算增殖抑制率(Inhibition rate,IR%),发现L-DT组IR%均高于空白对照组(P<0.05)。测得RMCs经L-DT在浓度为100mmol/L作用48h后对细胞的IR%达到50%。半定量RT-PCR结果显示,L-DT低(10mmol/L)、中(50mmol/L)、高(100mmol/L)三组与空白对照组相比均下调RMCs上AT1aRmRNA的表达(P<0.05),且高剂量组对AT1aRmRNA表达的下调作用更显著(P<0.05)。结论1.L-DT对RMCs的增殖有抑制作用,且呈时间和浓度依赖性。2.L-DT下调了RMCs上AT1aRmRNA的表达。3.L-DT可能是通过抑制患者肾小球系膜细胞上AT1aRmRNA的表达,来提高其GFR的水平。