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中药复方制剂作为中药的发展延伸,是当今预防和治疗疾病的常用药物。完善与提升中药复方制剂的质量标准,提升中药复方制剂的质控手段,全面提升中药复方制剂的整体质控水平,从而有助于提升中药复方制剂的安全和疗效。复方石韦片是由黄芪、石韦、苦参、萹蓄四味中药材组成的中药复方制剂,该品种收载于2015版《中国药典》,具有清热燥湿,利尿通淋的功能,用于下焦湿热所致的热淋,对于急性肾小球肾炎、肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎引起的小便不利、下肢浮肿、尿频、尿急、尿痛等症,疗效明显,复方石韦片以其疗效独特深受临床医生的信赖和广大患者的欢迎,具有很好的市场前景。复方石韦片现行标准中,定性鉴别有石韦中的绿原酸和萹蓄中的槲皮素,含量测定有黄芪中的黄芪甲苷和苦参中的苦参碱。中药复方制剂化学成分复杂,尽管单一成分的含量测定对其质量控制起到一定的作用,但不能从整体上全面评价中药复方制剂的质量。指纹图谱作为一种多指标综合评价质量控制模式,可以较全面的对中药复方制剂中化学成分进行定性及定量分析,因此本研究在复方石韦片现行质量控制方法的基础上进一步增加和完善其含量测定项,建立复方石韦片的指纹图谱,以全面控制其质量,建立复方石韦片中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪甲苷的含量测定方法,并将建立的指纹图谱方法和皂苷类含测方法应用于复方石韦片生产工艺过程中的质量控制,以考察生产过程中的量质传递,本研究还同时对复方石韦片中黄酮类成分的含量测定方法进行了初步摸索,对实现制剂过程的全面控制有重要意义。目的:1采用HPLC法建立复方石韦片的指纹图谱测定方法,并对其制剂过程进行质量控制,为实现全面控制复方石韦片的质量提供依据。2采用HPLC-ELSD法研究建立复方石韦片中3种皂苷类成分:黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪甲苷的含量测定方法,并考察这3种皂苷成分在复方石韦片制剂工艺过程中的量质转移,多指标成分控制其质量,完善与提升复方石韦片的质控方法。3采用HPLC法对同时测定复方石韦片中4种黄酮类成分:毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷的提取方法及色谱条件进行摸索,为进一步研究控制复方石韦片中黄酮类成分的质量提供试验基础。方法:1采用Agilent 5 TC C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)溶液,梯度洗脱(0~30~45~90min,A相为3%~11%~16%~30%),体积流量为1.0 m L/min,检测波长:235 nm,柱温:25℃,进样量:10μL,对复方石韦片及其中间体(浸膏、颗粒)样品进行测定。2采用高效液相色谱法-蒸发光检测器,使用Agilent 5-HC C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),进行梯度洗脱(0~30~60~80~85min,A相为30%~33%~45%~80%~30%),流速1.0 m L/min,柱温30°C,进样量20μL。ELSD参数:载气流速1.5 L/min;漂移管温度90°C,同时测定黄芪药材及复方石韦片成品、颗粒、浸膏样品中的黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷的含量,并考察这3种皂苷类成分在复方石韦片制备工艺过程中的量质传递。3通过考察不同的色谱条件,不同的提取方法等试验研究,摸索HPLC法同时测定复方石韦片中4种黄酮类成分:芒柄花素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量检测方法。结果:1测定14批不同批次的复方石韦片及3批复方石韦片中间体(浸膏、颗粒)样品指纹图谱,通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)对14批复方石韦片的指纹图谱进行相似度评价,得出复方石韦片HPLC指纹图谱的共有模式,标定出18个共有峰,指认出其中5个色谱峰,各批次共有峰相对保留时间的RSD值均<0.3%,各批次间相似度>0.990。相同批次的复方石韦片中间体(浸膏、颗粒)及其成品间相似度均>0.990,相关性良好。2建立了复方石韦片中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪甲苷的含量测定方法,该条件下3种成分均达到基线分离,黄芪皂苷Ⅰ的线性范围为20.48~655.38μg/m L(r=0.9987),平均加样回收率为99.58%,RSD值为2.95%;黄芪皂苷Ⅱ的线性范围为21.44~686.00μg/m L(r=0.9994),平均加样回收率为99.31%,RSD值为2.48%;黄芪甲苷的线性范围为16.74.44~535.57μg/m L(r=0.9997),平均加样回收率为99.51%,RSD值为2.46%。3通过HPLC法对复方石韦片中4种黄酮类成分:芒柄花素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量检测方法的摸索过程中,经过不同的提取方法及色谱条件的考察,样品色谱峰分离度达标,但阴性样品色谱图存在干扰,需进一步考察优化。结论:1建立的复方石韦片HPLC指纹图谱方法简便有效且重复性好,并可应用于其制剂制备工艺过程中的中间体的质量控制,首次从整体上控制评价复方石韦片的质量。2建立的HPLC-ELSD法测定复方石韦片中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪甲苷的含量检测方法准确稳定、简便可行、且专属性好,同时可用于考察复方石韦片制剂工艺过程中间体和黄芪药材中的3种皂苷类成分的量质转移,完善了复方石韦片的质控方法。3摸索研究HPLC法用于测定复方石韦片中芒柄花素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量方法过程中,样品色谱峰分离度达标,但阴性对照图谱存在干扰,目前未能建立其含量测定方法,需进一步研究摸索。