背景：　　牡蛎，软体动物类中最受欢迎的食物，在中国、日本和世界其他沿海国家都是十分重要的海鲜食品和保健食品。但它同时是过敏性食品之一，牡蛎的食用安全性令人担忧。因此开展对牡蛎过敏原的研究显得极具现实意义。针对现在的广泛应用特异性免疫治疗食物过敏的现状，获得高纯度、高免疫原性、低变应原性的标准化过敏原制剂势在必行。所以应用体外重组技术，以其获得高纯度的牡蛎过敏原蛋白；并通过基因突变高抗原性位点的方法，获得低变应原性但生物活性不变的牡蛎过敏原蛋白，为治疗牡蛎过敏症开辟一条道路。　　目的：　　本课题以牡蛎过敏原Cra g1为研究对象，体外重组其过敏原，并构建抗原性弱化的重组Cra g1蛋白，为牡蛎食物过敏反应疾病的诊断、制备单克隆抗体和进一步研制脱敏试剂奠定了良好的基础，对未来开发生产无过敏性的牡蛎相关食品具有指导作用。　　方法：　　通过蛋白信息库（Uniprot和Allergome）确定拟重组的牡蛎过敏原Cra g1的氨基酸和核酸序列。对Cra g1基因序列进行优化后，体外重组Cra g1基因。构建Cra g1蛋白的原核表达系统，通过亲和层析法纯化得到Cra g1蛋白，并进行免疫印迹鉴定。后续使用NetMHC-П在线预测网站分析出优势T细胞抗原表位，对编码优势表位的基因进行定点突变，使表位的抗原值降低，从而获得低过敏原性Cra g1蛋白并通过免疫印迹鉴定。　　结果：　　（1）得到利于表达的Crag1基因序列。　　（2）Cra g1蛋白在大肠杆菌Rosetta成功表达，并摸索出最优表达条件。　　（3）获得重组Cra g1纯化蛋白和三种低抗原性的Cra g1纯化蛋白。　　结论：　　本研究成功在体外重组Cra g1优化基因并获得纯化后的重组蛋白。并针对Cra g1过敏原抗原性进行分析后，定点突变与MHC-П结合力高的位点，最终获得三个过敏原性弱化的Cra g1蛋白。为日后诊断试剂的制备、疫苗的研制、无过敏原性食品的开发打下基础。