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目的建立耐氨甲蝶呤(MTX)对映体的人白血病BALL-1和CCRF-CEM细胞株,观察其生物学特性。分析MTX不同对映体耐药细胞株表皮生长因子受体(EGFR)信号通路相关基因的表达。方法浓度递增结合低剂量持续诱导的方法建立MTX不同对映体耐药细胞株,显微镜观察不同MTX对映体作用BALL-1和CCRF-CEM细胞株后细胞形态变化及活性差异,MTT法检测耐药细胞株和亲本细胞株耐药指数,细胞计数法绘制细胞生长曲线,Transwell实验检测D-(-)-MTX耐药细胞株与L-(+)-MTX耐药细胞株迁移能力差异,流式细胞仪检测细胞周期。RT-PCR法检测各细胞株EGFR、KRas、TGF、PI3K基因mRNA的表达情况。结果1.采用浓度递增结合低剂量持续诱导的方法,成功建立MTX不同对映体对BALL-1、CCRF-CEM细胞的耐药细胞株;MTT检测结果表明:L-(+)-MTX/BALL-1,CCRF-CEM对L-(+)-MTX的耐药指数分别为2.89,3.73。D-(-)-MTX/BALL-1,CCRF-CEM对D-(-)-MTX的耐药指数分别为9.65,10.72。2.荧光显微镜观察发现L-(+)-MTX作用后的BALL-1和CCRF-CEM凋亡数和非凋亡死亡数明显高于D-(-)-MTX,而活细胞数低于D-(-)-MTX。3. Transwell迁移实验结果提示D-(-)-MTX耐药细胞株迁移能力强于L-(+)-MTX耐药细胞株。4.细胞生长曲线和流式细胞仪检测显示:与亲本细胞BALL-1,CCRF-CEM相比L型和D型耐MTX细胞株的增殖速度减慢(P<0.05),S期细胞数量减少(P<0.05),G0/G1期细胞增多(P<0.05)。5. BALL-1细胞组(BALL-1,L型,D型耐MTX细胞株)有EGFR mRNA基因表达,目的基因与内参基因的光密度比值差异有统计学意义(F=641.41,P=0.000),L型与D型耐MTX细胞株光密度值差异有统计学意义(P=0.000);BALL-1细胞组有KRas mRNA基因表达(F=673.086,P=0.000),L型与D型耐MTX细胞株光密度值差异有统计学意义(P=0.004)。CCRF-CEM细胞组(CCRF-CEM,L型,D型耐MTX细胞株)亦有EGFR和K-Ras mRNA基因表达(F=151.323,P=0.000),(F=330.894,P=0.000),其中L型与D型耐MTX细胞株光密度值差异有统计学意义(EGFRmRNA P=0.000,K-RasmRNA P=0.003)。两组细胞有TGFmRNA表达,差异无统计学意义(P>0.05)。两组细胞无PI3KmRNA基因表达。结论D型耐MTX细胞株增殖能力大于L型耐MTX细胞株;D型耐MTX细胞株迁移能力大于L型耐MTX细胞株;EGFR及K-Ras mRNA基因表达在L型和D型耐MTX细胞株之间存在差异。