中间锦鸡儿黄酮合成相关基因的克隆和功能鉴定

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:weiweixiao09
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黄酮类化合物是一类天然的次生代谢产物,具有抗氧化,防治骨质疏松,抗肿瘤等作用,现已得到广泛的研究。本研究通过RT-PCR以及RACE技术从中间锦鸡儿中克隆到了两个黄酮类化合物合成途径上的基因,分别是 CiCHI(查尔酮异构酶)和CiFLS(黄酮醇合成酶),并构建了两个基因的植物表达载体,转化野生型拟南芥,结果如下:  1、中间锦鸡儿CiCHI基因cDNA全长1005bp,ORF为678bp(111bp-788bp),5’-UTR长110bp,3’-UTR长217bp,编码226个氨基酸,推测的分子量为24.413KD,理论等电点为5.66,是一种稳定的两性蛋白;CiFLS基因全长为1844bp,ORF为1020bp(568bp-1587bp),5’-UTR为567bp,3’-UTR为257bp,编码340个氨基酸,推测的分子量为38.765KD,是一种不稳定的疏水蛋白,理论等电点为6.01。  2、利用实时荧光定量PCR检测了不同处理下中间锦鸡儿幼苗中这两个基因的表达情况以及二者在不同组织部位的表达情况。CiCHI基因受到紫外、NaCl的诱导,表达趋势是先上升后下降,而ABA处理后其表达是受到抑制的;CiFLS基因对这三种处理均没有响应。二者在中间锦鸡儿幼苗中表达最高的部位是叶,表达最低的部位是根。  3、构建过表达载体p35S::CiCHI和p35S::CiFLS,并转化野生型拟南芥,得到纯合体株系。  4、检测过表达植株当中总黄酮和花青素含量。过表达CiCHI基因的拟南芥中总黄酮含量高于野生型拟南芥,而花青素含量变化不大;过表达CiFLS基因的拟南芥体内的总黄酮及花青素含量没有明显变化。
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