生物大分子毛细管电泳分离与预浓集方法研究

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核酸和蛋白质作为生命科学中最重要的生物大分子,一直是人们研究的重点。毛细管电泳以其高效、快速、样品用量少等特点而成为生命科学中研究生物大分子的重要分析分离手段。论文在毛细管电泳原理、分离模式介绍的基础上,论述了管壁涂层技术和毛细管电泳在线预浓集技术的研究进展。针对蛋白质分离的吸附问题,用自制的装置制备了交联键合型聚丙烯酰胺涂层柱,有效抑制了电渗流和碱性蛋白的吸附,分离柱效达到105理论塔板数/米,日内重现性和日间重现性均在5%之内。在无胶筛分模式下对蛋白质-SDS复合物显示了良好的分离效能。首次尝试了利用原位刻蚀的多孔导电膜和非涂敷的石英毛细管在区带电泳模式下对实际样品进样了浓缩分离。以血浆蛋白为研究对象,对富集和分离的条件进行了探讨,初步实现了血浆蛋白的浓缩和分离。以峰面积估算经300 s在线浓集取得了约120倍的浓缩。首次将DNA的无胶筛分与毛细管电泳多孔导电膜电进样浓缩相结合,通过对富集和分离条件的优化,实现了低浓度DNA样品片度的浓缩和分离。经300 s电进样浓缩取得了10-60倍的浓缩(峰面积),从而使常规紫外检测器(254 nm)的检测限降至0.05 ng/μL。毛细管上的多孔导电膜不仅能够对生物大分子的标准品进行浓集,而且还能对成分复杂的实际样品进行浓集。与传统样品处理方法相结合,基于多孔导电膜的毛细管电泳在线浓缩,脱盐,分离、检测一体化的分析系统有可能成为一种实际样品中低丰度蛋白和低浓度DNA分析有力手段。
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