生物质是地球上最丰富的可再生资源之一,它的开发和利用一直是研究的热点。近年来,食用菌产业蓬勃发展,随之产生的大量菇渣——生物质,它们的处理不当会导致多种环境问题,因此引发了人们的广泛关注。蛋白酶作为三大工业酶之一,寻求廉价的底物进行蛋白酶的工业生产具有重要意义。菇渣中含有的大量营养物质使之作为蛋白酶的生产底物成为可能。然而菇渣中的再利用研究中,将其转换为蛋白酶的研究寥寥无几。因此本研究利用高效的预处理方法提高菇渣的降解性能,优化枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）蛋白酶发酵工艺,并尝试利用热纤梭菌纤维小体（Clostridium thermocellum）作为纤维素酶,从而降低蛋白酶发酵工艺中纤维素酶CTec2的添加量。菌渣中含有大量的水提物,当水抽提工艺中固液比为1:10时,此时水抽提液中蛋白质、木糖和阿拉伯糖的含量分别为1.38 g/L、0.31 g/L和0.25 g/L。利用Na Cl O₂对水抽提菇渣进行预处理,正交设计得到最优预处理条件为:2:25,4 h,80°C,8%（w/v）Na Cl O₂。预处理前的水抽提工艺不仅会影响菇渣原料中组分含量,而且,与未经水抽提的预处理菇渣相比,经水抽提预处理菇渣的还原糖得率以及酶解效率分别提高了19.3%和10.2%。以预处理菇渣作为基质,探究发酵工艺对蛋白酶发酵效率以及产物得率的影响。高底物浓度下获得的酶解糖液进行分步糖化发酵产蛋白酶,分别以30 mg/m L酶解糖液和1 g/L尿素作为碳源和氮源时,发酵液中蛋白酶活力为4250 U/m L。水抽提液已成功回收用于同步糖化共发酵产蛋白酶,蛋白酶生产效率较分步糖化发酵有明显提高,且在较低的纤维素酶CTec2负载量下时仍可获得相当的酶活力。实现了基于热纤梭菌的蛋白酶发酵。通过添加吐温-20和纤维素酶CTec2可协同促进热纤梭菌的糖化性能,提高发酵液中葡萄糖以及木糖浓度。此发酵糖液用于蛋白酶生产的还原糖得率为149.3 U/mg,与仅利用纤维素酶CTec2酶解糖液获得的还原糖得率相当。此外,通过添加吐温-20可以促进枯草芽孢杆菌发酵产酶。利用热纤梭菌纤维小体进行同步糖化发酵产蛋白酶,发酵残渣作为饲料添加剂回收利用,实现农业废弃物的可持续发展。