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近年来,多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)的药理功能受到越来越多的关注。但作为药物,需要高纯度的DHA单体。本论文探讨了从卤虾(ArtemiaSalinaLinnaeus)蛋白粉中制备高纯度DHA乙酯及其对沙鼠脑缺血的保护作用。
制备实验分为四个主要步骤:(1)脂肪酸提取;(2)脂肪酸乙酯化;(3)乙酯的尿素包合;(4)包合后的乙酯的涂银硅胶柱分离。卤虾蛋白粉原料中含22.7%的脂肪酸及10.3%的DHA。采用酯:尿素:乙醇为1:2:6的包合比在室温(25℃)和4℃下进行富集,将DHA含量分别提高至28.2%(得率为37.5%)和48.3%(得率为30.6%)。以不同浓度的丙酮一正己烷溶液为洗脱剂,涂银硅胶柱层析将尿素包合的乙酯(4℃)进一步提高。在丙酮浓度为20%的洗脱组分中获得纯度为100%的DHA(洗脱得率为60.7%)。硝酸铝预处理过的涂银硅胶柱层析的初步放大试验表明:柱分离效果没有明显改变且可反复使用。
脑缺血是脑损伤及随后神经元功能丧失的主要原因之一。本论文又研究了DHA乙酯对不同龄沙鼠脑缺血的保护作用。
对于成年沙鼠,预加药4周并阻断双侧颈总动脉30分钟,实验结果表明:DHA乙酯(150mg/kg/day)显著地减少了再灌流30分钟内(0,5,10,15,30分钟)脑花生四烯酸(AA)的积累,阻止了Na+,K+-ATPase酶活性的下降:通过防止再灌流24小时后脑前列腺素TXB2水平的增加和6-Keto-PGFla水平的降低,维持两者之间的平衡;并有效地减轻了脑水肿程度,减小了脑损伤体积。其DHA乙酯可能是通过减少脑缺血再灌流过程中花生四烯酸释放而发挥保护功效的。
对于幼年沙鼠,预加药10周并阻断双侧颈总动脉10分钟,DHA乙酯(150mg/kg/day)虽然未明显提高脑组织中超歧化氧化酶(SOD)活性,但却显著提高了脑组织中抗氧化分子GSH的含量和抗氧化酶GSH-PX及CAT的活性;降低脑缺血再灌流引起的脂质过氧化水平;增加NO含量。有效地阻止了脑组织中Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPas活性下降;维持了细胞内外的钠、钙和钾离子平衡,从而减轻了脑水肿和脑神经元的死亡。其DHA乙酯可能是通过提高脑抗氧化能力而发挥保护作用的。
由于脑缺血损伤的病理生理涉及多个环节和多种因素,因此,DHA乙酯对脑缺血保护作用的确切机制还有待于进一步的实验研究。