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随着葛根素注射液和清开灵注射液在临床上的广泛应用,其不良反应的报道逐年增多,严重的有可能导致过敏性休克甚至死亡。二者引发的过敏反应中有相当一部分是首次给药,且发生在给药30min内,表现为明显的类过敏反应特征。类过敏的临床反应症状与Ⅰ型过敏反应相似,主要表现为恶心、呕吐、腹痛腹泻、荨麻疹、血管性水肿、过敏性哮喘等,然而其发生机制与过敏反应不同,故而被称为“类过敏反应”。与Ⅰ型过敏反应比较,类过敏反应为首次接触致敏原即可引发过敏样症状,不需要免疫球蛋白介导,而是直接刺激肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒释放过敏性介质导致的。建立类过敏反应评价模型对清开灵注射液和葛根素注射液进行类过敏反应评价对降低临床中用药风险具有重要的意义,本实验室己建立的模型有麻醉Beagle犬类过敏反应检测模型等,本研究在其基础上进一步改善实验方法,通过DSI清醒动物生理信号遥测系统建立清醒Beagle犬类过敏反应检测模型,对清开灵注射液和葛根素注射液引起的类过敏反应进行评价;分离犬外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),评价清开灵注射液和葛根素注射液对细胞因子的影响,探讨类过敏反应与细胞因子的关系。1清醒Beagle犬类过敏反应检测模型的建立目的:建立清醒Beagle犬类过敏反应检测模型,并用Tween80和Compound48/80评价该模型的可行性。方法:通过Beagle犬的植入手术,将遥测系统的植入子植入犬的体内,手术恢复后,经静脉推注分别给予犬Compound48/80和0.05%、0.1%、0.2%、0.5%的Tween80,采用Dataquest A.R.T.4.3系统连续监测给药过程中及给药后Beagle犬血压和心率的变化并观察犬的体征变化,研究血压和心率作为该类过敏反应检测指标的灵敏性。结果:Tween80和Compound48/80给药后犬出现骚动、皮肤潮红、巩膜充血等类过敏反应症状,且血压出现不同程度的下降,心率加快。结论:建立的清醒Beagle犬类过敏反应检测模型具有良好的可行性,血压、心率及犬的体征变化可作为该模型灵敏的检测指标。2对清开灵注射液及葛根素注射液的致类过敏反应进行评价目的:利用清醒Beagle犬类过敏反应检测模型对清开灵注射液及葛根素注射液进行评价,研究二者在清醒犬引发的类过敏反应情况。方法:分别经静脉滴注以120mL·h-1的给药速度给予犬不同浓度的清开灵注射液和葛根素注射液,采用Dataquest A.R.T.4.3系统连续监测给药过程中及给药后Beagle犬血压和心率的变化并观察犬的体征变化。结果:1.2mL·kg-1,2.3mL·kg-1,11.5mL·kg-1清开灵注射液对犬血压和心率均未产生明显的影响,Beagle犬也未出现明显的体征变化;0.24mL·kg-1葛根素注射液对犬血压和心率的影响不明显,而0.47mL·kg-1葛根素注射液引起犬血压明显降低,平均动脉压在药后30min时从药前的(115.35±7.73)mmHg降低到(91.74±10.18) mmHg (n=4, P<0.01),收缩压从药前的(147.33±14.65)mmHg降低到(112.88±6.51) mmHg (n=4, P<0.01),但未见明显的体征变化,心率变化也不明显。结论:120mL·h-1的给药速度下清开灵注射液未引起清醒Beagle犬发生类过敏症状;葛根素注射液可使清醒犬的血压降低,并与剂量相关。3利用犬PBMC评价清开灵注射液和葛根素注射液对细胞因子的影响及类过敏反应与细胞因子的关系目的:初步探究清开灵注射液和葛根素注射液对Beagle犬细胞因子的影响,研究类过敏反应与细胞因子之间的关系。方法:通过梯度密度离心法分离犬PBMC,分别与类过敏阳性药Compound48/80及Tween80、清开灵注射液、葛根素注射液充分进行反应后利用相应的犬细胞因子ELISA试剂盒测定PBMC释放的细胞因子水平,主要测定的细胞因子为IFN-γ、TNF-α、IL-6。结果:Compound48/80与Tween80使PBMC分泌的TNF-α水平下降,清开灵注射液组和葛根素注射液组的TNF-α水平也出现了明显的下降,且具有统计学意义上的显著性差异PBMC与各组药物反应后分泌的IFN-γ水平有不同程度的下降,其中清开灵注射液引起的下降最为明显。对IL-6的浓度进行检测,检测结果显示各组的吸光度值均小于标准对照组的最小值,因此所测结果无意义。结论:Compound48/80, Tween80以及清开灵注射液和葛根素注射液可引起犬细胞因子IFN-γ、 TNF-α的分泌量减少。