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烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)是危害农作物产量和品质的主要病毒之一,从生防角度控制TMV引起的病毒病是当前研究热点。本研究从采集的云南罗平TMV病毒病重发区健康烟株根际土壤中用局部枯斑法筛选得到1株具有显著拮抗活性的菌株,并对其进行了种类鉴定,研究了其拮抗活性及作用机理,并对其具生物活性的小分子化合物进行了研究,得到结果如下:(1)通过局部枯斑法对筛选得到的菌株YNLP-2的拮抗活性进行了研究,菌株浓度在5.6×108cfu/mL时对TMV枯斑抑制率高达99%以上。通过菌体形态鉴定、16S rDNA序列比对和生理生化测定表明该菌株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus. Frankland)。局部枯斑法生物测定表明该菌株上清液和菌体重悬液均具有显著拮抗TMV活性,且为一株热稳定性高和酸碱稳定性强的菌株。田间抗病毒小区试验显示该菌株对病毒病综合防治效果达到45.65%。(2)局部枯斑法生物测定表明,乙酸乙酯萃取后得到的无机相和有机相对TMV拮抗活性分别为92.667%±1.528%和92.333%±2.517%。提取物8-2(提取液无水乙醇与纯净水比例8:2)有机相旋蒸浸膏的丙酮溶解液和提取物7-3(提取液无水乙醇与纯净水比例7:3)无机相旋蒸浸膏的纯净水溶解液对TMV抑制效率分别为92.000%和90.667%,说明每个洗脱体系小分子化合物的混合物对TMV具有显著拮抗活性。此两个洗脱梯度浸膏溶液经气相色谱-质谱联用(GC-MS)测定,菌株次级代谢产物中含有12种性质稳定的活性小分子化合物。(3)透射电镜观察显示YNLP-2菌株对TMV病毒粒体的破坏作用表现为该菌株可将TMV典型的杆状病毒粒体破坏成小片段。通过SDS-PAGE电泳发现菌株处理病毒粒体的条带亮度和宽度与对照一致,说明菌株对TMV病毒外壳蛋白无破坏作用;无机相洗脱体系7:3提取物纯净水溶解液处理病毒粒体的条带亮度和宽度比对照浅和窄,说明此洗脱梯度提取物对病毒外壳蛋白有一定的破坏作用。(4)荧光定量检测TMV相对含量表明,YNLP-2菌株能够诱导烟草产生抗性。抗病品种三生烟-NN和感病品种NC89分别侵染TMV病毒汁液后,三生烟-NN中可检测到的Ca2+、K+、H2O2含量高于NC89中的含量,O2变化不明显;菌株侵染NC89叶片后,烟草中的K+、H2O2的含量提高。初步推断烟草的YNLP-2菌液诱导抗性机制与K+、H2O2含量增高有关。本研究首次筛选得到一株对TMV具有显著拮抗活性的菌株YNLP-2,在菌体浓度为5.6×108cfu/mL条件下,对TMV枯斑抑制率高达99%以上,经鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus.Frankland)。对其发酵液的乙酸乙酯粗提物进行分离鉴定,确定了12种小分子化合物。