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目的:少突胶质细胞(OLIG)是构成中枢神经系统(CNS)髓鞘的主要成分,其变化与免疫反应之间有一定联系。脑缺血损伤后CNS血脑屏障通透性发生改变,允许血液中的免疫成分进入脑内,同时OLIG被转化成抗原提呈细胞(APC)和免疫效应细胞,释放各种免疫抑制因子、激活APC提呈抗原,发挥抗原清除作用,抑制脑组织再生及修复。Nogo-A是CNS髓鞘中主要的轴索抑制因子,表现出强烈的抑制轴突生长作用,其主要由OLIG表达,离体和活体实验均已证实它与动物CNS神经轴索的再生关系密切。最新文献报道,脑梗死造成的神经功能缺损不仅与梗死灶局部损伤后神经细胞坏死和凋亡有关,而且也与远隔梗死灶相关部位的继发性神经细胞坏死和凋亡有关。已有文献报道,脑缺血后在缺血边缘区及远隔部位大量胶质细胞活化增殖,活化的胶质细胞对于维持脑微环境以及防止神经元死亡起一定的作用,但过度活化的胶质细胞可以释放有害因子,并且形成的胶质疤痕可通过免疫学机制释放轴索抑制因子(如Nogo-A)影响神经元轴突的生长、突触的重建及阻断脑组织微循环,这表明脑梗死后远隔部位的继发性损伤与Nogo-A蛋白的抑制作用密切相关。本实验采用改良的Zea Longa法制备持续性闭塞大鼠大脑中动脉的脑缺血模型,应用免疫组织化学法观察远隔部位小脑皮层Nogo-A蛋白的动态表达。
方法:健康雄性SPF级SD(Sprague-Dawley)大鼠60只,体质量250-280g,随机分为实验组(n=30,制作大脑中动脉闭塞模型)和假手术对照组(n=30),每组又按大脑中动脉闭塞时间的不同随机分为1d、3d、5d、7d、10d五个亚组,每个亚组6只大鼠。参照Zea Longa法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,Zea Longa的5级4分法评分,将评分在1-3分的动物纳入下一步实验。HE染色观察小脑组织形态变化,免疫组化法检测小脑皮层Nogo-A蛋白的表达,然后进行统计学分析,P<0.05有显著性差异。
结果:
1、HE染色结果示:大脑中动脉闭塞(MCAO)后1d、3d、5d、7d、10d组与假手术组比较,神经细胞的数量、形态分布正常,未见明显改变。
2、免疫组织化学检测Nogo-A蛋白表达:Nogo-A蛋白阳性免疫反应产物主要分布于OLIG的胞浆,染色呈棕黄色细颗粒沉积。假手术组各时间点Nogo-A蛋白表达无明显差异;MCAO组Nogo-A蛋白的表达于术后第5d、7d、10d较假手术组明显增高,第1d、3d无统计学差异。
结论:大鼠大脑中动脉闭塞后远隔部位小脑皮层Nogo-A蛋白呈动态变化,梗死灶远隔部位的继发性损伤可能与轴索抑制因子Nogo-A蛋白有关。