宫腔粘连(intrauterine adhesions，IUA)即由于各种原因导致子宫内膜纤维化及疤痕化、不同程度缺失、内膜变薄、增生及分泌不足、子宫前后壁粘连、宫腔容积缩小。人流、药流，尤其术后并发炎症是宫腔粘连的主要原因，随着年轻女性人流、药流等宫腔操作增多，宫腔粘连已成为临床常见病之一。宫腔粘连是不孕、流产、早产的主要原因。宫腔粘连治愈率低下，手术切开后粘连易复发、妊娠率低，因此宫腔粘连的治疗是临床工作的一大难题。部分原因在于目前对IUA的研究大多数仅局限在它的诊断和治疗方面，对其形成机制和病理生理变化缺乏了解，国内外也缺乏相关研究资料。 国内研究报道宫腔粘连患者子宫内膜上皮的基质金属蛋白酶—9(matrix metalloproteinase—9，MMP—9)表达强度明显低于非宫腔粘连患者，MMP—9的低表达可使蛋白水解活性降低，破坏了纤维蛋白溶解和合成的平衡，导致细胞外基质(ECM)的沉积，子宫内膜逐渐被结缔组织取代，最终导致子宫内膜纤维化，IUA形成。 目的：本课题拟通过观察离体宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞雌激素干扰后MMP—9的表达，探讨宫腔粘连子宫内膜基质细胞对雌激素的反应与非宫腔粘连子宫内膜有何不同，为进一步探索宫腔粘连的发病机制、疗效欠佳的原因和如何促进患者子宫内膜生长厚度、改善宫腔环境、胚胎着床条件和提高妊娠率提供部分实验室依据。 材料与方法: 1.细胞培养 选择2008年4月到12月在中山二院妇产科因宫腔疾病行宫腔镜检查或手术的宫腔粘连患者15名，非宫腔粘连患者20名，年龄20～40岁。术前3个月未用激素，无子宫内膜原发或继发恶性病变，无高血压、糖尿病、全身结缔组织病变等。术中获取子宫内膜，低温条件下立即转移到实验室进行分离培养，采取酶消化、机械过滤、选择性贴壁等方法分离子宫内膜基质细胞和子宫内膜腺上皮细胞，并对子宫内膜基质细胞进行体外培养。 2.子宫内膜基质细胞HE染色 HE染色观察细胞形态。 3.子宫内膜基质细胞纯度鉴定 采用波形蛋白抗体进行免疫细胞化学法鉴定细胞纯度。 4.MTT法绘制生长曲线 MTT法得出以时间相对吸光度变化的曲线反映细胞增殖的速度，描绘细胞生长曲线，观察细胞生长周期。 5.雌二醇对子宫内膜基质细胞生长周期的影响 流式细胞仪检测细胞周期，观察E2对宫腔粘连子宫内膜基质细胞(观察组)及非宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞(对照组)增殖和凋亡的影响。 6.雌二醇对子宫内膜基质细胞MMP—9表达的影响 ELISA法测定宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞和宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞在雌激素刺激前后MMP—9的表达。 结果: 1.子宫内膜基质细胞培养情况： 分离后的原代子宫内膜基质细胞细胞活性高，可有限传代10-20代。 2.子宫内膜基质细胞HE染色观察细胞形态： 染色后观察子宫内膜基质细胞呈梭形或三角形，细胞轮廓清晰，胞质丰富，核明显，可见核仁。 3.细胞纯度鉴定结果： 分离保留细胞免疫组化结果显示，波形蛋白阳性，且阳性率较高，达(98.75±1.30)％。 4.细胞生长曲线 细胞初期成对数生长，8-10天达平台，12天之后开始调亡。 5.雌二醇对子宫内膜基质细胞生长周期的影响 雌二醇作用24小时后，两组增殖指数均增高，观察组增高幅度低于对照组；观察组凋亡指数观察组升高，对照组降低；观察组S期细胞百分比无明显变化，对照组升高。 6.雌二醇对子宫内膜基质细胞MMP—9表达的影响 雌二醇作用24h后与基础状态相比，观察组和对照组表达量均有所升高，但观察组低于对照组，且升高的幅度亦低于对照组；对照组分泌期MMP—9表达高于增殖期；观察组轻度患者MMP—9表达较中度患者高。 结论: 1.雌二醇对宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞增殖作用弱于对非宫腔粘连者，同时促进其凋亡，对S期百分比没有影响，推测宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞增殖调控机制与非宫腔粘连者有所不同，子宫内膜基质细胞对雌二醇的反应低下可能是宫腔粘连易发因素之一。 2.雌二醇作用后，官腔粘连患者子宫内膜基质细胞与非宫腔粘连子宫内膜基质细胞MMP—9的表达均升高，后者明显高于前者。 3.MMP—9表达强弱与粘连程度相关，轻度宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞MMP—9的表达高于中度宫腔粘连者。 4.增殖期子宫内膜基质细胞MMP—9的表达低于分泌期。