第一部分 库欣病合并高泌乳素血症患者的临床研究[背景]垂体腺瘤是一种目前比较常见的良性颅内肿瘤,垂体腺瘤在颅内肿瘤的发病率约为10%,腺瘤的占位效应、垂体激素分泌功能的紊乱及术后的并发症等,可对患者的日常生活造成严重影响,严重时甚至威胁生命。因此,在早期能够正确诊疗垂体腺瘤,对患者预后有着非常重要的意义。在功能性垂体腺瘤中,垂体促肾上腺皮质激素腺瘤是一种比较重要的类型,在功能性垂体腺瘤中约占5%-15%,目前,垂体腺瘤被广泛的研究,相关文献较为多见。但是,对于库欣病合并高泌乳素血症方面的研究却并不多见。由于库欣病合并高泌乳素血症患者的发病率相对较低,所以到目前为止,库欣病合并高泌乳素血症患者还没有建立较为完整的临床研究资料,相关文献较少。本研究的目的在于通过比较单纯促肾上腺皮质激素增高的库欣病患者、单纯泌乳素瘤的患者和库欣病合并高泌乳素血症患者的临床资料,来揭示库欣病合并高泌乳素血症患者的临床特点。[目的]本部分论文主要通过统计学方法来分析垂体瘤患者性别、年龄、肿瘤大小、临床症状与体征、病程、激素的水平、影像学表现、术后并发症、术后复发等情况,来探讨库欣病合并高泌乳素血症、单纯泌乳素瘤和单纯库欣病患者之间的差异。通过归纳和总结,逐步提高对库欣病合并高泌乳素血症的认识,有助于改善库欣病合并高泌乳素血症诊断和治疗的方法。[方法]采用回顾性分析的方法,对2005年至2013年期间在山东大学附属省立医院神经外科就诊、经手术治疗并由病理确定的单纯库欣病(CD组)、单纯泌乳素瘤(PRL组)和库欣病合并高泌乳素血症(CD+PRL组)的患者进行了分析。采用SPSS16.0统计学分析软件,对所统计的数据资料进行相关性的研究。分析结果采用卡方检验、Fisher’s确切检验法、Student’s检验、Mann-Whitne y检验、Bonferroni校正、双变量相关分析,并以P<0.05为差异具有统计学意义。[结果]1.与CD组相比,CD+PRL组发病年龄早、肿瘤平均直径更大,且海绵窦侵袭的Knosp分级更高；CD+PRL组的月经紊乱和视野缺损的发生率高于CD组。CD组的进行性肥胖和高血压的发生率要高于CD+PRL组。CD+PRL组术前及术后的PRL水平均高于CD组。CD组的手术后PRL水平高于CD+PRL组,但是术后的皮质醇水平二者之间无统计学差异。CD+PRL组患者术后激素水平正常化率较CD组更低。CD和CD+PRL组的垂体瘤的复发率分别是8.3%和36.1%,存在显著统计学差异。2.与PRL组相比,CD+PRL组的发病年龄较PRL组年轻,头痛头晕、进行性肥胖、月经紊乱、多尿、烦渴、高血压和糖尿病的发生率也更高。CD+PRL组患者术前血清皮质醇和PRL水平都显著高于PRL组患者,并且术后CD+PRL组患者激素水平正常化率较PRL组更低,也存在更高的复发率。[结论]1.与CD组相比,CD+PRL患者具有发病年龄早、典型外貌特征少,但肿瘤直径较大,有更多临床特征(包括PRL分泌导致的月经紊乱)等特点,同时CD+PRL患者激素水平正常化率较CD组更低,也存在更高的复发率。2.与PRL组相比,CD+PRL患者发病年龄早,有更多的并发症,激素水平术后正常化率较低,拥有更频繁的复发率。第二部分库欣病合并高泌乳素血症患者的基础研究第一节 库欣病合并高泌乳素血症患者的体液免疫与细胞免疫[背景]神经-内分泌-免疫网络(Neuro-endocrine-immunoregulatorynetwork, NEI)研究在机体正常生理机能的整体水平调节,对维持机体稳态等方面存在十分重要的意义。目前已有证据表明,神经内分泌和免疫系统之间有双向调节作用的存在。免疫细胞能够在分泌神经递质和内分泌激素同时,可通过表面广泛存在相应的受体来识别中枢神经系统和内分泌系统产生的信号分子,调节其功能。库欣病是激素分泌性垂体瘤比较重要的一种类型,由于腺瘤分泌过多的促肾上腺激素分泌激素(ACTH),导致皮质醇增多症。高泌乳素血症(hyperprolactinemia, HPRL)是下丘脑-垂体功能紊乱疾病的一种。目前,在库欣病合并高泌乳素血症的细胞免疫与体液免疫的研究较少,成为制约该疾病制定精确治疗方案的一个重要因素。[目的]本节研究以库欣病合并高泌乳素血症患者为对象,通过与单纯库欣病的患者进行对比,初步对其外周血免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)和补体(C3、C4)含量、T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞分布、NK细胞的情况进行分析,并对其进行外周血抗核抗体的检测,以一个全新的角度探讨库欣病合并高泌乳素血症患者细胞免疫和体液免疫的变化,从而为治疗效果和预后的进一步提高,提供理论和分子水平的依据。[方法]1.研究对象：选取20例库欣病合并高泌乳素血症患者及40例单纯库欣病患者。2.用速率散射免疫比浊法检测血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM补体C3、C4含量,流式细胞仪检测外周血CD4+T、CD8+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+NK细胞及CD19+B淋巴细胞。3.应用间接免疫荧光法检测患者血清中的抗核抗体,观察间期和分裂期的HEp-2细胞以及肝细胞是否呈现特异性荧光模型。4.统计学分析：应用统计分析软件SPSS 16.0对数据进行分析,P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.与单纯库欣病组相比,库欣病合并高泌乳素血症患者组血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C3、C4的含量均无明显差异(P>0.05)2.合并组外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD3-CD16/56+NK细胞与单纯库欣病组相比,水平下降(P<0.00l,P<0.001,P<0.001)。合并组CD4+T/CD8+T淋巴细胞比值与单纯库欣病组相比显著降低(P<0.001)。3.库欣病合并高泌乳素血症患者组与单纯库欣病组相比,血清中的抗核抗体检出比率没有显著差异(P=0.439)[结论]1.库欣病伴高泌乳素血症者外周血体液免疫水平和库欣病对照组比较无显著性差异,提示激素PRL对体液免疫功能的影响较小。2.库欣病伴高泌乳素血症者外周血辅助Th淋巴细胞亚群水平、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值、NK细胞下降,提示其细胞免疫功能异常主要表现为辅助T细胞、NK细胞减少。3.库欣病伴高泌乳素血症者及库欣病患者体内存在自身免疫现象,但二者中抗核抗体检出率没有显著差别。第二节 库欣病合并高泌乳素血症患者KIR及配体HLA-C多态性研究[背景]激素主要是通过对免疫细胞的调节来实现对免疫系统的作用。近几年来,垂体瘤的发病呈明显上升的趋势。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cellimmunoglobulin-like receptor, KIR)是NK细胞和某些效应T细胞表面表达的可以特异性识别人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)I类分子的受体,具有重要的免疫调节作用。鉴于KIR的高度多态性已得到证实、前期的研究,库欣病伴高泌乳素血症患者的细胞免疫功能异常及迄今未见KIR与HLA-C与此病关联性研究的报道,我们提出了问题,KIR及其配体HLA-C是否与库欣病伴高泌乳素血症患者的易感性存在关联。[目的]本节对单纯库欣病人群和库欣病伴高泌乳素血症者外周血采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分别进行了KIR及其配体HLA-C的分型分析以探讨KIR基因及其配体HLA-C和库欣病伴高泌乳素血症者易感性的关系。不但对于更深的了解库欣病伴高泌乳素血症者的发病机制研究,还也可为疾病高危人群的早期预防诊断和干预提供理论支持,为今后进一步研究多激素腺瘤等相关研究提供技术和数据参考平台。[方法]1.研究对象：研究分析的100例样本包括80例单纯库欣病患者和20例库欣病合并高泌乳素血症患者。2.基因组DNA的提取：静脉采血3ml,EDTA抗凝,按照操作说明采用外周血DNA提取试剂盒进行基因组DNA的提取,-20℃保存备用。3.KIR分型：用PCR-SSP方法对所有样本进行KIR基因分型,KIR基因位点检测6个抑制性基因(2DLI,2DL2,2DL3,2DL5,3DL1,3DL3)、6个活化性基因(2DS 1,2DS2,2DS3,2DS4,2DS5,3DS1)。引物根据KIR的基因序列及文献设计。应用GeneAmp9700扩增仪进行产物的扩增。扩增产物进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳,用凝胶图像分析仪进行电泳图象的分析,以便对每个样本进行KIR基因分型分析。4. HLA-Cw基因分型：用PCR-SSP方法对所有样本进行HLA-Cw基因分型,HLA-Cw基因位点检测8个等位基因HLA-Cw*01-08。5.统计学分析：用SPSS16.0软件对各组基因表现频率、基因频率、基因型频率和单倍型频率进行统计学分析,P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.与单纯库欣病组比较,KIR2DL3的表型频率在合并组较高,且有统计学差异(P=0.02),并且单倍型A及基因型A/A在合并组中的频率显著增高(P=0.024,P=0.04)。2.HLA-Cw*08基因频率在合并组显著高于单纯库欣病组(P=0.012)[结论]1.库欣病伴高泌乳素血症患者与单纯库欣病对照组有不同的KIR基因表型、基因型及单倍型表现；不平衡的活化/抑制性KIR比例,可能是导致机体平衡紊乱的基础。2.KIR与其配体HLA-C的相互作用可能参与了激素介导的的免疫反应过程。