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根据我国法律,未经安全评价的油菜产品不容许进口和在我国种植。进入产业化的转基因品种需要建立检测和监测方法。2004年,我国允许拜耳公司研发的6个转基因油菜品种(MS1×RF1、MS1×RF2、MS8×RF3、OXY235、Topas19/2和T45)和孟山都公司研发的1个转基因油菜品种RT73(GT73)作为加工原料进口。对转基因油菜及其产品进行检测和监测是实施转基因油菜安全管理的关键。随着转基因产品的定量标识制度出台,转基因产品定性、定量检测方法的研究显得十分迫切和重要。本实验以德国拜耳公司培育的6个转基因品种(MS1×RF1、MS1×RF2、MS8×RF3、OXY235、Topas19/2和T45)为实验材料,采用基因组步移法研究了转基因油菜品系MS1、RF1、RF2、MS8、RF3、OXY235、Topas19/2和T45的外源基因插入位点序列特征,并根据插入DNA与基因组DNA的融合序列信息建立了MS1、RF1、RF2、MS8、RF3、OXY235、Topas19/2和T45转化事件特异性定性、定量检测方法。并且对每个检测体系的特异性、灵敏度、重复性、准确性及可靠性进行了验证。1.MS1右边界(5’端)旁侧序列片段大小为1165bp,特异性引物MS1RG/MS1RV扩增片段大小为141bp,检测灵敏度为2.5个拷贝(0.013%),建立的标准曲线决定系数R2值为0.995,LOD(limit of detection)和LOQ(limit of quantification)分别为2.5个拷贝和25个拷贝。2.RF1左右边界(3’和5’端)旁侧序列片段大小分别为1592bp、3192bp,定性引物RF1RG/RF1RV和RF1LG-F/RF1LV-R扩增片段大小为99bp、284 bp,检测灵敏度均为5个拷贝(0.013%),定量引物RF1RG/RF1RV和RF1LG/RF1LV扩增片段大小为99 bp、117bp,建立的标准曲线决定系数R2值分别为0.996和0.988,LOD值均为5个拷贝;LOQ为25个拷贝。3.RF2右边界(5’端)旁侧序列片段大小为2978bp,特异性引物对RF2RG/RF2RV扩增片段大小为138bp,检测灵敏度为5个拷贝(0.013%),建立的标准曲线决定系数R2值为0.998,LOD和LOQ分别为5个拷贝和25个拷贝。4.MS8右边界(3’端)旁侧序列片段大小为907bp,特异性引物Ms8RG/Ms8RV扩增片段大小为123bp,检测灵敏度为2.5个拷贝(0.013%),建立的标准曲线决定系数R2值为0.991,LOD和LOQ分别为20个拷贝和25个拷贝。5.RF3右边界(3’端)旁侧序列片段大小为694bp,特异性引物Rf3RG/Rf3RV扩增片段大小为92bp,检测灵敏度为50个拷贝(0.13%),建立的标准曲线决定系数R2值为0.995,LOD和LOQ分别为20个拷贝和25个拷贝。6.OXY235左右边界(5’和3’端)旁侧序列片段大小分别为923bp、1109bp,特异引物OXYLG/OXYLV和OXYRG/OXYRV扩增片断大小发分别为105 bp,124bp,检测灵敏度分别是100个拷贝(0.13%)和10个拷贝(0.013%)。建立的标准曲线决定系数R2分别为1.000和0.998, LOD值均为10个拷贝或接近10个拷贝;LOQ值均为50个拷贝。7.Topas19/2左边界(3’端)旁侧序列片段大小为823bp,特异性引物TOPLG/TOPLV扩增片段大小为110bp,检测灵敏度为10个拷贝(0.013%),建立的标准曲线决定系数R2值为0.995,LOD和LOQ分别为5个拷贝和50个拷贝。8.T45左右边界(3’端和5’端)旁侧序列片段大小分别为2154bp、1616bp,根据分离的左右边界(3’端和5’端)设计特异引物T45LG/T45LV和T45RG/T45RV,扩增片断大小分别为107bp,117bp。用根据右边界(5’端)设计的引物对T45RG/T45RV扩增低拷贝模板时,荧光信号迅速衰减。选用引物对T45LG/T45LV建立定量检测方法,建立的标准曲线决定系数(R2)为0.996。本研究所建立的事件特异性定性检测方法可以识别特异的转基因油菜品系、定量检测方法可以准确定量样品中特异转基因油菜成分的含量,为我国转基因油菜的安全管理和即将实施的定量标识提供了技术支持和科学依据。