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第一部分毒胡萝卜素对人眼离体前囊膜晶状体上皮细胞的影响目的:探讨毒胡萝卜素对年龄相关性白内障患者离体前囊膜晶状体上皮细胞的影响。方法:收集2020年2月1日至2020年9月1日在扬州大学附属医院眼科门诊诊断为年龄相关性白内障并接受PHACO手术患者的晶状体前囊膜,共计184片,均采用连续环形撕囊（CCC）取出。分为两大组:毒胡萝卜素（TG）组和TG联合冲洗（模拟I/A）组。TG组共104片前囊膜,随机均分为4组:对照组、0.5μMTG组、1.0 μM TG组、2.0 μM TG组。每组取20片用于前囊膜晶状体上皮细胞（LECs）死亡率的研究,取3片行扫描电子显微镜（SEM）、3片行透射电子显微镜（TEM）检查,观察不同浓度TG处理后的LECs形态学及微观结构改变情况。TG联合冲洗组（模拟I/A）共80片前囊膜,随机均分为4组:对照组、0.5μMTG联合冲洗组、1.0μMTG联合冲洗组、2.0μM TG联合冲洗组,用于前囊膜LECs脱落面积的研究。采用Image J软件进行LECs死亡率和脱落面积计算;SPSS 23.0软件对数据进行统计分析,采用Welch方差分析比较TG组和TG联合冲洗（模拟I/A）组组间的细胞死亡率和脱落面积;采用Games-Howell检验进行细胞死亡率和细胞脱落面积占比组间两两比较。结果:1.TG促进人眼离体前囊膜LECs死亡对照组、0.5 μM TG组、1.0 μM TG组、2.0 μM TG组前囊膜LECs死亡率组间差异有统计学意义（WelchF=21.514,P＜0.001）。TG浓度为0.5 μM、1.0μM、2.0 μM时,作用3 min可导致离体前囊膜LECs死亡率增加（P＜0.05）。2.TG促进人眼离体前囊膜LECs的清除对照组、0.5 μM TG联合冲洗组、1.0 μM TG联合冲洗组、2.0μM TG联合冲洗组前囊膜LECs脱落面积占比组间差异有统计学意义（Welch F=26.408,P＜0.001）。TG浓度为0.5 μM、1.0 μM、2.0 μM时,作用3 min后用BSS冲洗离体前囊膜1 min,可导致LECs脱落面积占比增加（P＜0.05）,有助于离体前囊膜LECs的清除。3.电子显微镜检查（1）TEM检查:离体晶状体前囊膜经过BSS处理后,LECs呈现单层排列分布,与前囊膜紧密连接,LECs胞间连接紧密,细胞及细胞器形态、结构完整。随着TG浓度的增加,LECs胞间连接逐渐松散、消失,细胞及细胞器形态、结构逐渐破损。经过2.0μM TG处理后,LECs与前囊膜连接完全消失,呈现完全分离状态,大部分细胞内结构辨认不清,细胞膜破裂,胞内容物溶解、流出。（2）SEM检查:离体晶状体前囊膜经过BSS处理后,LECs形态正常,呈单层排列,与前囊膜紧密连接,LECs胞间连接紧密,细胞膜完整,LECs表面可见大量圆形突起、球体及微绒毛。随着TG浓度的增加,LECs逐渐皱缩和破损,胞内容物流出,胞间连接逐渐中断、消失。结论:1.TG（浓度为0.5 μM-2.0 μM）可导致人眼离体前囊膜LECs死亡。2.TG（浓度为0.5 μM-2.0 μM）联合冲洗（模拟I/A）可导致人眼离体前囊膜LECs脱落。3.TG（浓度为0.5μM-2.0μM）可导致人眼离体前囊膜LECs形态和微观结构呈坏死样改变,还可以导致LECs与前囊膜连接疏松,随着TG浓度的增加,作用效果越明显。第二部分毒胡萝卜素对人晶状体上皮细胞（SRA 01/04）生物学特性的影响及分子机制目的:研究毒胡萝卜素对体外培养的人晶状体上皮细胞（SRA01/04）生物学特性的影响及分子机制。方法:设置不同浓度的TG组,分别为对照组、0.5 μMTG组、1.0 μMTG组、2.0μM TG组。通过划痕实验和Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、CCK-8和EdU实验检测人晶状体上皮细胞（LECs）的迁移、侵袭、增殖能力;流式细胞术检测LECs凋亡情况;Western Blot检测LECs凋亡蛋白（Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax）、内质网应激蛋白（GRP78、CHOP）和上皮-间质转分化蛋白（α-SMA、Vimentin、Fibronectin、E-cadherin）表达情况。结果:1.TG抑制LECs迁移:对照组、0.5μMTG组、1.0μMTG组、2.0μMTG组划痕愈合百分比和细胞迁移数组间差异有统计学意义（P＜0.05）。划痕愈合百分比和细胞迁移数随着TG浓度的升高而降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.TG抑制LECs侵袭:对照组、0.5μM TG组、1.0 μM TG组、2.0 μMTG组细胞侵袭数组间差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞侵袭数随着TG浓度的升高而降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。3.TG抑制LECs增殖:对照组、0.5 μMTG组、1.0μMTG组、2.0 μMTG组细胞存活率与增值率组间差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞存活率与增值率随着TG浓度的升高而降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.TG促进LECs凋亡:对照组、0.5 μMTG组、1.0μMTG组、2.0 μMTG组细胞凋亡率和凋亡蛋白表达量组间差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞凋亡率随着TG浓度的升高而升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。Caspase-3、Caspase-9、Bax表达量增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Bcl-2的表达量降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.TG诱导LECs发生内质网应激（ERS）:对照组、0.5μMTG组、1.0μMTG组、2.0μMTG组凋亡蛋白表达量组间差异有统计学意义（P＜0.05）。CHOP、GRP78表达量增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6.TG诱导LECs发生上皮-间质转分化（EMT）:对照组、0.5 μM TG组、1.0 μM TG组、2.0μM TG组凋亡蛋白表达量组间差异有统计学意义（P＜0.05）。α-SMA、Fibronectin、Vimentin的表达量增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）;E-cadherin表达量随TG浓度的增加而减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.TG（浓度为0.5 μM-2.0μM）能抑制LECs迁移、侵袭和增殖,呈浓度依赖性。2.TG（浓度为0.5μM-2.0μM）能促进LECs凋亡,呈浓度依赖性。3.TG（浓度为0.5 μM-2.0 μM）能诱导LECs的凋亡蛋白Caspase-9相对蛋白表达量增加,呈浓度依赖性;导致Caspase-3、Bax相对蛋白表达量增加;Bcl-2相对蛋白表达量降低。4.TG（浓度为0.5 μM-2.0 μM）能诱导LECs的ERS蛋白GRP78与CHOP相对蛋白表达量增加。5.TG（浓度为 0.5 μM-2.0 μM）能诱导 LECs 的 EMT 蛋白 α-SMA、Fibronectin、Vimentin相对蛋白表达量增加;E-cadherin相对蛋白表达量降低,呈浓度依赖性。