基于等温杂交链式反应及酶联免疫吸附法对李斯特菌的检测

来源 :长春理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:siquan
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李斯特菌在我们的生活环境下无处不在,并且李斯特菌存在于绝大多数食物食品中。许多国家已经采取了相应的控制措施并制定相应的准则,避免因李斯特菌感染而引起疾病。李斯特菌传统常规的分离培养法、免疫学检测方法耗时长,需要特定的酶催化,检测灵敏性低,而且只适用于实验室检测,因此,我们试图建立李斯特菌新型检测方法,等温、耗时短、不需要酶、不需要专业试验人员操作,适合大众化检测。磁珠结合等温杂交链式反应(Hybridization Chain Reaction,HCR)病原菌检测法:以磁珠为检测平台,利用夹心结构使抓取探针、待检测靶标和检测探针连接,通过HCR信号放大,最后通过连接的HRP酶催化TMB显色,实现肉眼检测的可视化。本方法具有高灵敏性,李斯特菌浓度为3×10~4 CFU/mL,沙门氏菌最低检测浓度为3×10~3 CFU/mL,。磁珠结合纳米花病原菌检测法:PBS缓冲液条件下,二价铜和ConA蛋白制备的纳米花作为转化信号标记物,偶联抗体的磁珠捕获李斯特菌,进一步与纳米花结合,最后通过纳米花释放铜离子促进两条短核酸片段点击化学反应连结,核酸试纸条实现可视化检测,建立的检测方法具有很高的灵敏性,最低检测线是4 CFU/mL。本实验建立的两种检测方法通过不同的检测平台,实现对单增李斯特菌特异检测,不但灵敏高,简化了操作过程,成本低,抗干扰能力强,可以应用于不同样品中单增李斯特菌检测,在食品卫生检验、临床诊断等一些领域具有更加广阔的前景。
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