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目的:本研究通过检测miR-424-3p在膀胱癌组织中的表达并分析其与膀胱癌患者临床病理参数的关系,同时通过体外细胞实验探讨miR-424-3p对膀胱癌细胞顺铂耐药性的影响以及相关机制,旨在明确miR-424-3p在膀胱癌细胞对顺铂耐药具体作用机制,为寻找新的膀胱癌治疗分子靶标、逆转膀胱癌顺铂耐药奠定理论和实验基础。方法:本研究选取40例膀胱癌组织和癌旁相应正常组织,检测其中miR-424-3p的表达,分析其与膀胱癌患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、复发等的关系。采用逐步递增顺铂浓度的方法建立膀胱癌顺铂耐药细胞系(T24/DDP)。采用MTT法检测该耐药细胞系的药物敏感性,检测该细胞系与亲本细胞系(T24)中miR-424-3p的表达。将miR-424-3p inhibitor转染T24/DDP细胞,对转染后的T24/DDP细胞利用MTT法检测其细胞增殖活性,并采用流式细胞技术对细胞凋亡率进行研究检测,之后利用transwell小室法及细胞划痕实验分别对细胞的侵袭能力和迁移能力进行检测分析。运用在线Targetscan与MicroCosm数据库查找miR-424-3p可能的靶基因,miR-424-3p通过miRBase数据库检索获得。3’UTR序列通过检索UCSC Genome Browser获得,同时利用pubmed进行blast比对进行确认。分别将携带有双荧光素酶报告基因的PTEN-MUT、PTEN-WT质粒与miR-424-3p共转染T24细胞,检测上述各组细胞中荧光素酶的活性。将miR-424-3p mimic转染T24/DDP细胞,检测细胞中PTEN mRNA和蛋白的表达。后续将T24细胞随机分为control组、DDP组、DDP+miR-424-3p组、DDP+miR-424-3p+PTEN组。对上述各组细胞分别采用MTT法检测其IC50,然后利用流式细胞技术检测细胞凋亡率,最后采用western blot法检测上述各组细胞中PTEN、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达。结果:与癌旁正常组织相比,膀胱癌组织中miR-424-3p的表达显著增高。miR-424-3p的表达与膀胱癌患者的年龄、性别无关,而与肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、1年内复发有关,即膀胱肿瘤越大、恶性化程度越高,则miR-424-3p的表达量也越高,1年内复发率也越高。本研究采用顺铂药物浓度递增的方法对T24细胞进行体外诱导,最终获得0.6μg/mL顺铂作用下稳定生长的耐药细胞系T24/DDP。MTT试验结果显示,T24/DDP细胞对顺铂的耐药指数(resistance index,RI)为9.55。T24/DDP细胞中miR-424-3p的表达水平较T24细胞明显增高(P<0.05)。在顺铂的作用下,miR-424-3p inhibitor组细胞的增殖活性较control组降低,其中在第72h和96 h时细胞的增殖活性明显低于control组(P<0.05);miR-424-3p inhibitor组细胞的凋亡率较control组显著增高(P<0.05),侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞迁移率明显降低(P<0.05)。经过检测PTEN为miR-424-3p的靶基因,miR-424-3p在PTEN上所绑定的位置位于3’UTR区域。在荧光素酶活性检测方面,与control组相比,PTEN-WT+miR-424组的活性显著降低(P<0.05),而PTEN-MUT+miR-424组的荧光素酶活性则无明显变化(P>0.05),提示PTEN为miR-424-3p的靶基因,其表达受到miR-424-3p的负调控。与control组相比,miR-424-3p-in组细胞中PTEN mRNA和蛋白的表达水平均显著增加(P<0.05)。与control组相比,DDP组细胞的IC50有所下降,但差异不显著(P>0.05);DDP+miR-424-3p组较DDP组细胞的IC50显著增高(P<0.05);与DDP组相比,DDP+miR-424-3p+PTEN组细胞的IC50显著降低(P<0.05)。与control组相比,DDP组细胞的凋亡率有所增高,但差异不显著(P>0.05);DDP+miR-424-3p组较DDP组细胞的凋亡率显著降低(P<0.05);与DDP组相比,DDP+miR-424-3p+PTEN组细胞的凋亡率显著增高(P<0.01)。在蛋白检测方面,与control组相比,DDP组细胞中PTEN、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达无显著差异(P>0.05);与DDP组相比,DDP+miR-424-3p组细胞中PTEN蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),PI3K和p-Akt蛋白的表达水平显著增高(P<0.05),但Akt蛋白则无明显变化(P>0.05);与DDP组相比,DDP+miR-424-3p+PTEN组细胞中PTEN蛋白的表达水平显著增高(P<0.05),PI3K和p-Akt蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),但Akt蛋白则无明显变化(P>0.05)。结论:miR-424-3p通过抑制其靶基因PTEN的表达,调控PI3K/Akt信号通路,降低膀胱癌细胞对顺铂的敏感性。