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目的:运用代谢组学结合分子生物学验证的方法发现正常高值血压痰瘀互结证的生物标志物和异常代谢途径,采用脂质组学技术研究逐瘀化痰降压方干预前后正常高值血压痰瘀互结证脂质代谢的变化及方剂的干预机制。
方法:1.采用代谢组学-代谢网络-分子生物学验证的流程,以高效液相色谱及飞行时间质谱联用并结合模式识别的方法,寻找特征的生物标志物,分析其代谢途径。运用代谢网络构建及网络分析的方法,挖掘出交互作用密切的关键靶点。运用ELISA、Westernblot验证代谢标志物、靶点及炎症状态,揭示正常高值血压痰瘀互结证的证候特征、代谢差异及可能的发病机制。2.采用脂质组学的思路和方法,探索正常高值血压痰瘀互结证脂质代谢的异常以及逐瘀化痰降压方的干预机制。
结果:1.从正常对照组、正常高值血压痰瘀互结证组、高血压病痰瘀互结证组血清样本中筛选出差异性代谢标志物99个,涉及胆汁酸代谢、芳香族氨基酸代谢等关键代谢通路。6-羟多巴胺、TGR5、BAAT、MPO、IL-6和IL-10在正常对照组、正常高值血压痰瘀互结证组、高血压病痰瘀互结证组血清中的表达均存在差异。2.正常高值血压痰瘀互结证人群体内检测出32个显著差异的脂质标志物及8条脂质相关代谢通路。白三烯C4、白三烯D5、硫酸雄酮、硫酸睾酮、溶血磷脂酰乙醇胺类、磷脂酰胆碱类等32个标志物在正常对照组、正常高值血压痰瘀互结证组及高血压病痰瘀互结证组患者间存在差异性代谢,甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇-锚生物合成、亚油酸代谢、鞘脂代谢、α-亚麻酸代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、花生四烯酸代谢及类固醇激素生物合成共8条代谢通路存在代谢差异。3.中药逐瘀化痰降压方能降低正常高值血压痰瘀互结证受试者血压、临床症状,磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、LysoPC(18∶1(9Z))、孕酮、20α-二氢黄体酮、5β-孕甾烷-3,20-二酮、3α-羟基-5β-孕甾烷-20-酮、四氢孕酮、胆甾醇硫酸盐、SM(d18∶1/18∶0)、产气菌素发生显著的代谢变化,涉及了甘油磷脂代谢、类固醇激素生物合成、糖基磷脂酰肌醇-锚生物合成、亚油酸代谢、鞘脂代谢、α-亚麻酸代谢、赖氨酸降解、花生四烯酸代谢和色氨酸代谢共9条代谢通路。
结论:正常人群、正常高值血压痰瘀互结证及高血压病痰瘀互结证之间,存在代谢标志物及代谢通路的显著差异,说明在高血压病早期已产生了胆汁酸代谢、芳香族氨基酸代谢、花生四烯酸代谢等的变化,这可能是高血压早期存在血管炎症状态所致。中药逐瘀化痰降压方能通过改善正常高值血压痰瘀互结证人群体内的色氨酸代谢、亚油酸代谢、甘油磷脂代谢等,从而控制、延缓正常高值血压痰瘀互结证的疾病进展。代谢组学结合分子生物学验证的研究路径能够有效探析正常高值血压痰瘀互结证的代谢实质,是揭示中医证候内涵的有力工具。
方法:1.采用代谢组学-代谢网络-分子生物学验证的流程,以高效液相色谱及飞行时间质谱联用并结合模式识别的方法,寻找特征的生物标志物,分析其代谢途径。运用代谢网络构建及网络分析的方法,挖掘出交互作用密切的关键靶点。运用ELISA、Westernblot验证代谢标志物、靶点及炎症状态,揭示正常高值血压痰瘀互结证的证候特征、代谢差异及可能的发病机制。2.采用脂质组学的思路和方法,探索正常高值血压痰瘀互结证脂质代谢的异常以及逐瘀化痰降压方的干预机制。
结果:1.从正常对照组、正常高值血压痰瘀互结证组、高血压病痰瘀互结证组血清样本中筛选出差异性代谢标志物99个,涉及胆汁酸代谢、芳香族氨基酸代谢等关键代谢通路。6-羟多巴胺、TGR5、BAAT、MPO、IL-6和IL-10在正常对照组、正常高值血压痰瘀互结证组、高血压病痰瘀互结证组血清中的表达均存在差异。2.正常高值血压痰瘀互结证人群体内检测出32个显著差异的脂质标志物及8条脂质相关代谢通路。白三烯C4、白三烯D5、硫酸雄酮、硫酸睾酮、溶血磷脂酰乙醇胺类、磷脂酰胆碱类等32个标志物在正常对照组、正常高值血压痰瘀互结证组及高血压病痰瘀互结证组患者间存在差异性代谢,甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇-锚生物合成、亚油酸代谢、鞘脂代谢、α-亚麻酸代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、花生四烯酸代谢及类固醇激素生物合成共8条代谢通路存在代谢差异。3.中药逐瘀化痰降压方能降低正常高值血压痰瘀互结证受试者血压、临床症状,磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、LysoPC(18∶1(9Z))、孕酮、20α-二氢黄体酮、5β-孕甾烷-3,20-二酮、3α-羟基-5β-孕甾烷-20-酮、四氢孕酮、胆甾醇硫酸盐、SM(d18∶1/18∶0)、产气菌素发生显著的代谢变化,涉及了甘油磷脂代谢、类固醇激素生物合成、糖基磷脂酰肌醇-锚生物合成、亚油酸代谢、鞘脂代谢、α-亚麻酸代谢、赖氨酸降解、花生四烯酸代谢和色氨酸代谢共9条代谢通路。
结论:正常人群、正常高值血压痰瘀互结证及高血压病痰瘀互结证之间,存在代谢标志物及代谢通路的显著差异,说明在高血压病早期已产生了胆汁酸代谢、芳香族氨基酸代谢、花生四烯酸代谢等的变化,这可能是高血压早期存在血管炎症状态所致。中药逐瘀化痰降压方能通过改善正常高值血压痰瘀互结证人群体内的色氨酸代谢、亚油酸代谢、甘油磷脂代谢等,从而控制、延缓正常高值血压痰瘀互结证的疾病进展。代谢组学结合分子生物学验证的研究路径能够有效探析正常高值血压痰瘀互结证的代谢实质,是揭示中医证候内涵的有力工具。